国际知名肿瘤领域学术期刊Cell传来强有力强有力的中国好声音

肝细胞癌 (HCC) 是全球最常见的恶性肿瘤之一，也是癌症相关死亡的第三大常见原因。目前，分子靶向治疗和免疫治疗在肝癌领域取得了重大进展，但索拉非尼仍然是许多晚期肝癌患者（包括局部晚期肝癌患者）的首选治疗标准。探索对索拉非尼耐药的反应，增加肿瘤细胞对索拉非尼的敏感性，是提高肝癌治疗效果的潜在途径。

近日，肿瘤学领域国际知名学术期刊《细胞》（Cell）传来来自中国的强烈声音。来自中国的一项研究表明，增强索拉非尼治疗敏感性的关键候选药物PPT1抑制剂联合索拉非尼可能是HCC的一种新的有效治疗策略。 【肿瘤资讯】与你一起见证！

研究背景

HCC是人类最致命的疾病之一，严重威胁着人们的生命和健康1。随着分子靶向治疗的发展，索拉非尼为晚期HCC患者带来了新的期望。两项大型 III 期随机临床试验证明了索拉非尼对晚期 HCC2-3 患者的生存益处。然而，在索拉非尼治疗组中观察到的生存获益仅为中等。一项大型亚洲试验表明，接受索拉非尼治疗的患者的中位生存期仅比安慰剂组长 2.3 个月。这可能是由于索拉非尼治疗的适应性耐药和副作用，导致HCC患者存活率不足。

由于HCC的遗传异质性，部分患者对索拉非尼表现出原发性耐药，自噬在HCC中的作用已达成共识4。研究表明，索拉非尼可抑制自噬的主要调节通路——哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路，促进轻度自噬，从而限制索拉非尼的作用。因此，将自噬抑制与索拉非尼联合给药可能是逆转适应性抵抗和增加HCC细胞对索拉非尼敏感性的潜在有价值的策略。

棕榈酰蛋白硫酯酶 1（PPT1） 已知在各种癌症中广泛过表达，并与各种癌症的总生存期缩短有关。一种选择性和有效的小分子 PPT1 抑制剂 一种具有有效的溶酶体抑制作用效应（溶酶体为自噬抑制提供了理想的靶点），因此靶向 PPT1 表达联合索拉非尼治疗 HCC 可能是一种潜在有价值的临床策略。然而，溶酶体功能的潜在机制仍不清楚。迄今为止，有目前尚无逆转索拉非尼适应性耐药或增加HCC对索拉非尼敏感性的报道。本研究将探讨的作用机制，以及联合索拉非尼非尼在动物模型中的治疗作用，有望提供新的为未来临床实践中治疗HCC的有效替代方案。

研究方法

通过癌症基因组图谱数据库中的数据挖掘，初步探讨了PPT1蛋白在HCC中的作用。此外，HCC 细胞系 Hep 3B 和 Hep 1-6 经 PPT1 处理或针对 PPT1 处理，通过 CCK-8 法、克隆形成法、染色法、免疫荧光染色法、印迹法和PI-V细胞凋亡测定。学习功能。通过动物模型皮下注射研究靶向PPT1的治疗效果。

研究结果与讨论

PPT1高表达与HCC患者预后不良相关，是HCC预后不良的独立危险因素

与正常组织相比，HCC组织中PPT1 mRNA的表达明显高于正常肝组织（图1B）。免疫组化分析还证实，HCC组织中PPT1蛋白的表达明显高于正常肝组织（图1C）。大多数HCC细胞系在体外也表现出比正常肝细胞更高的PPT1蛋白表达（1D）。

图 1A-D：PPT1 在 HCC 组织中高表达

-分析表明，高 PPT1 表达通常与无进展生存期 (PFS) 和总生存期 (OS) 之间的交叉相关（图 1E）。使用 Cox 回归的多变量分析进一步证实了 PPT1 的高表达是 HCC 患者 OS 的独立危险因素（图 1F）。

图 1E-F：PPT1 高表达是 HCC 患者 OS 不良的独立危险因素

索拉非尼诱导自噬并诱导适应性抵抗； PPT1在索拉非尼耐药细胞系中显着上调

已知哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路是自噬的主要调控通路。以往的研究发现，索拉非尼通过抑制mTOR复合物1()的活性，抑制pi3kΚ/AKT/mTOR信号通路来诱导自噬。为了阐明索拉非尼诱导的自噬体是诱导自噬体形成还是抑制自噬体降解，索拉非尼诱导的自噬信号通路中最关键的特征蛋白 LC3-II 的结果从自噬体形成的激活中积累，而非自噬体降解步骤被抑制。此外，Ad--GFP-LC3腺病毒感染的实验也证实了索拉非尼可以促进自噬（图2C）。因此，本研究提示索拉非尼可诱导自噬，诱导适应性抗性。

关于PPT1在HCC中的表达是否与体外对索拉非尼的反应有关，结果表明在本研究建立的索拉非尼耐药细胞系中PPT1蛋白水平显着上调，进一步证明PPT1在索拉非尼耐药中起A调节作用。

图 2D。 PPT1在索拉非尼耐药细胞系中显着上调

PPT1抑制剂通过抑制溶酶体抑制自噬，提高对索拉非尼的敏感性

溶酶体为自噬抑制提供最佳靶点6。本研究中PPT1和溶酶体相关膜蛋白1( )的免疫荧光双标记证实PPT1和PPT1共定位，表明PPT1位于细胞内溶酶体中。

为了进一步测试是否对溶酶体有抑制作用，本研究使用了探针。与对照组相比，处理导致溶酶体脱酸显着增加（图3E，F），相应地抑制了自噬体的溶酶体降解。

图 3E-F。 PPT1抑制剂通过抑制溶酶体抑制自噬

此外，研究还证实PPT1抑制剂通过抑制mTOR促进早期自噬，通过抑制溶酶体抑制晚期自噬。当细胞用索拉非尼和索拉非尼单独处理时，与仅索拉非尼组相比，P62 表达增加。本研究结果表明索拉非尼诱导的自噬被阻断（图3H）。

图 3H。索拉非尼诱导的自噬被阻断

PPT1 抑制剂诱导溶酶体膜通透性增加

.1/BMP/ASM通路被认为是溶酶体膜稳定性的主要调节通路。初步研究表明，PPT1的功能可能与.1/BMP/ASM通路密切相关，PPT1抑制剂可影响体外溶酶体膜的稳定性。 .1/BMP/ASM 途径诱导酶促膜通透性 (LMP) 并导致酶促脱酸。本研究进一步证实了PPT1敲低对溶酶体膜通透性和信号通路的影响与PPT1抑制剂一致，但PPT1调控溶酶体膜稳定性的确切分子机制仍有待进一步阐明。

诱导线粒体介导的细胞凋亡

线粒体介导的细胞凋亡被认为是肿瘤细胞凋亡的主要途径。诱导 LMP 并导致溶酶体破坏，溶酶体组织蛋白酶分散在整个细胞质中。 Bax 被激活，线粒体膜电位去极化。最后，细胞色素c被释放，-3被激活，导致细胞凋亡（图5G，H），即靶向PPT1通过线粒体介导的途径诱导细胞凋亡。

图5.可诱导线粒体介导的细胞凋亡

显着增强抗肿瘤免疫反应

抗原呈递细胞DC可以将抗原呈递给CD8+细胞毒性T淋巴细胞，并进一步激活CD8+ T细胞。体内给药 7 天显着增加了肿瘤中活化的 CD8+ T 淋巴细胞和活化的 CD4+ T 淋巴细胞的数量。经检测，当活化T淋巴细胞的分泌水平与肿瘤组织中的干扰素γ（IFN-γ）水平相当时，与对照组相比，该组的IFN-γ水平显着上调。此外，通过相关性分析，PPT1的表达水平与免疫细胞浸润水平相关。因此，研究结果证实PPT1的表达水平与HCC肿瘤微环境中的免疫浸润有关。

图6.PPT1抑制剂促进免疫反应

联合索拉非尼治疗免疫小鼠肿瘤模型疗效显着

在 HCC 免疫小鼠肿瘤模型中，在体内检查了单一疗法及其与索拉非尼联合的治疗效果。结果表明，肿瘤体积缩小的方式与索拉非尼相似，与索拉非尼合用发挥协同作用，与对照组相比，对肿瘤生长的抑制作用最大。进一步的研究发现，联合治疗组中的肿瘤细胞表现出最大程度的核缺失，这意味着与单药治疗和模拟对照组相比，联合治疗破坏了大部分肿瘤细胞。分析显示肿瘤内细胞凋亡水平呈相同趋势（图7）。此外，联合治疗组小鼠的存活时间显着延长（P

图7.联合索拉非尼在HCC肿瘤模型中的作用

结论

PPT1抑制剂可阻断索拉非尼诱导的自噬，增强索拉非尼敏感性，这可能与抑制.1/BMP/ASM通路和溶酶体有关。此外，PPT1的表达水平与HCC肿瘤微环境中的免疫浸润有关，可显着增强抗肿瘤免疫反应。具有适应性反应性的智能有机纳米载体可改善肿瘤药物递送和疗效并减少副作用，可能具有广阔的应用前景。鉴于 PPT1 靶向联合索拉非尼在免疫肿瘤模型中的显着疗效，这种联合疗法可能成为未来治疗 HCC 的一种新的有效替代方案。

参考文献

1. 杨 Y，林 J，郭 S，薛 X，王 Y，邱 S，等。 RRM2 是一个用于 .细胞诠释。 2020;20(1):587.

2. 普格 RN。在 。 N Engl J Med。 2008;359(23):2497–8.

3.Ann-Lii C 等人。和在亚洲- 与：a III。

4. 中新的朱YJ，B，Wang HY，Chen L. Acta Sin.2017;38(5):614–22.

5. S 等人。中的。诠释J。 2012;131(3):548–57.

6. MC、大众、RK、JD。至于PPT1，一个新的。摩尔细胞。 2018;5(1):.