色谱法分离吉非替尼 10月20日上市公司重大资产重组信息

高效液相色谱法测定吉非替尼原料药 叶连宝, 吴杰, 杨洁波, 哲玉婷, 胡乔红（广东省广州药学院药学院） 摘要：吉非替尼原料药的含量采用高效液相色谱法测定。C18柱（250×4.6mm，5μm），流动相乙腈-乙酸铵缓冲液（40:60，用氨调节pH 8.0±0.05），流速1.0 mL·min-1，检测波长247 nm，柱温40 ℃，吉非替尼能很好地与杂质峰分离。=0.9998）线性关系好，平均回收率为99.68%，RSD=0.94%(n=9）。该方法简单、快速、重现性好，可用于吉非替尼的测定。关键词：高效液相色谱；吉非替尼；原料药；连宝、吴洁、杨洁波、佘玉婷、胡乔红( , , , ) 的含量测定：对原料药中的 HPLC 用 C18 (250×4.6mm,5μm), - (40:60, pH to 8.50±0.05), 流速为1.@ >0 mL·min -1 , 为 , 为 40℃。的为 50~400μg·mL-1(r=0.9998) 平均值为 99.68%, RSD= 0.

吉非替尼含量的HPLC测定---1.5，拖尾因子小于1.5，理论板数大于5000，吉非替尼API中吉非替尼含量为50μg· mL-1~400μg·mL-1线性度好，精密度测试的RSD0.45%，重复性测试的RSD0.45%，稳定性试验0.011%，回收试验平均回收率为99.68%，RSD为0.94%。分析方法重现性好、可靠。可用于吉非替尼原料的质量控制和制剂研究。图1 仪器和试剂 高效液相色谱仪（VWD可变波长检测器，美国公司），超声波清洗机（昆山超声仪器有限公司），pHS-25数字酸度计（上海宏仪仪器有限公司）、型式分析天平（日本岛津公司）、无菌注射器（湖南平安医疗器械科技有限公司、规格: 2.5mL, 5mL)，微孔膜(0.22 μm)。吉非替尼对照品（TLC.Inc，纯度>99.5%），吉非替尼供试品（自制），乙腈为色谱级（默克公司），二乙基亚砜为色谱级（阿拉丁公司），醋酸铵分析纯（阿拉丁公司），氨水分析纯（天津贝斯特化工有限公司），水为双蒸水。无菌注射器（湖南平安医疗器械科技有限公司，规格：2.5mL、5mL），微孔膜（0.22 μm）。吉非替尼对照品（TLC.Inc，纯度>99.5%），吉非替尼供试品（自制），乙腈为色谱级（默克公司），二乙基亚砜为色谱级（阿拉丁公司），醋酸铵分析纯（阿拉丁公司），氨水分析纯（天津贝斯特化工有限公司），水为双蒸水。无菌注射器（湖南平安医疗器械科技有限公司，规格：2.5mL、5mL），微孔膜（0.22 μm）。吉非替尼对照品（TLC.Inc，纯度>99.5%），吉非替尼供试品（自制），乙腈为色谱级（默克公司），二乙基亚砜为色谱级（阿拉丁公司），醋酸铵分析纯（阿拉丁公司），氨水分析纯（天津贝斯特化工有限公司），水为双蒸水。

2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱：C18柱，（250×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-醋酸铵缓冲液（1.5 g 醋酸）铵，加1000 mL水，加氨水调pH至8.0±0.05）(40:60)；检测波长：247 nm；柱温：40 ℃；流速：1.0 mL/min；进样量：20 μL。2.2溶液制备对照品溶液：精密量取吉非替尼对照品10mg，置于量瓶中，加溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。供试品：取约25mg吉非替尼，准确称量，置25 mL容量瓶中，加溶，溶解，稀释至刻度，摇匀，2.3 系统适用性试验 按“2.2”中的方法制备对照品和供试品溶液，进样试验，记录色谱图。吉非替尼峰与相邻杂质峰分离良好，分辨率>1.5，吉非替尼计算的理论塔板数不低于5000。2.4 吉非替尼参比溶液和样品溶液在具体测试照片“2.2”下制备，测试，记录色谱图。测试结果表明：在色谱条件下，基线稳定，空白流量相对稳定。含量测定无干扰，色谱图见图2。 (a) (b) (c)est 。2 HPLC 取另2ml供试品溶液，共5份，置于10ml容量瓶中。采用以下苛刻条件（酸、碱、氧化、高温、光照）进行破坏性试验，然后按上述色谱条件进行HPLC测定：记录色谱图（图1.3@>结果表明在酸、碱、氧化、高温五种严苛条件下，各杂质峰均能与吉非替尼峰基线分离，各种降解产物均不干扰API中吉非替尼的测定，且方法特异性好。

(a)(b) (c)(d)(e) Fig.3 The by acid (a), (b), (c), high (d) and test (e) .5 检验精密称量的线性关系适量吉非替尼对照品用流动相配制成浓度为51.4@>101.4@>151.4@>201.4@>301.4@>400μg·mL- 1 份参比溶液，每次进样 20 μL，按“2.1”下的色谱条件测定吉非替尼峰面积。以溶液浓度（X）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，进行线性回归，绘制标准曲线。实验结果表明：在50~400μg·mL-1范围内，吉非替尼的浓度与峰面积呈良好的线性关系。回归方程为 Y=36.819X+15.191(r=0.999< @8）.2.6 在色谱条件下精密试压“2.@ >1”，准确吸取参比溶液，重复进样6次，记录色谱图，计算得到的RSD峰面积为 0.0084%。这说明该方法的精密度很好。2.@ >7 重复性测试 同批次取6个样品，按照上面“.2.2”下的方法制备供试液，进样分别测定，计算吉非替尼的平均含量为9 8.14μg·mL-1，RSD=0.45% (n=6） 结果表明该方法具有良好的重复性. 记录色谱图，计算峰面积的RSD为0.0084%。这说明该方法的精密度很好。2.@ >7 重复性测试 同批次取6个样品，按照上面“.2.2”下的方法制备供试液，进样分别测定，计算吉非替尼的平均含量为9 8.14μg·mL-1，RSD=0.45% (n=6） 结果表明该方法具有良好的重复性. 记录色谱图，计算峰面积的RSD为0.0084%。这说明该方法的精密度很好。2.@ >7 重复性测试 同批次取6个样品，按照上面“.2.2”下的方法制备供试液，进样分别测定，计算吉非替尼的平均含量为9 8.14μg·mL-1，RSD=0.45% (n=6） 结果表明该方法具有良好的重复性.

2.8 稳定性测试 取“2.2”项下配制的测试溶液，在配置后03、7、21天进样测量，考察样品溶液的稳定性。结果表明：吉非替尼样品峰面积RSD=0.011%。结果表明，吉非替尼样品溶液在21以内稳定。 2.9 回收率测试 准确称取9个用相同方法测定的已知含量样品，每3个样品为一组，置于10ml容量瓶中，准确加入适量对照品溶液（按80%、100%、120%比例），加入乙腈定容，摇匀，过滤，取连续滤液，按“2.”下的色谱条件测定@>1"。3 吉非替尼可以很好地与杂质峰分离，吉非替尼可以很好地与杂质峰分离。在50~400 μg·mL-1（r=0.999<@8）范围内，替尼平均回收率为99.68%，RSD=0. 94%(n=9）.

该方法简单、快速、重现性好，可用于吉非替尼的测定。参考：plc (GB)。表皮生长因子[J]. 的, 2002, 27(4): 339-3451[2] 白H,. on in 50 with non-cell lung[J]. ( of , 2010, 20(2)@) >:134-139.[] Y, Y, A, et al. re-to with non-cell lung by [J]．肺, 2010 , 68(2)@>:269-272 [4] 反相高效液相色谱法[J]. (中国药学, 2012, 23(13):1225-1226.@) >[]吴LM,GH,Li QG. of the HPLC[J]. (当代医学, 2011, 17(25):23-2 5.叶连宝(1979-),男（汉族），副教授，博士，硕士生导师，主要从事化工原料研究，电话 E-mai： 通讯作者：胡巧红，女（1969-），博士，教授，