肝癌索拉非尼耐药细胞中的作用及潜在的分子机制研究

【摘要】 背景：原发性肝癌（ , HCC）是最常见的恶性肿瘤之一，其死亡率居所有恶性肿瘤的第三位。每年有近 100 万人死于这种疾病。尽管近年来手术、放疗、化疗等各种治疗方法不断改进，但肝癌患者的发病率稳步上升，5年生存率仍较低。近年来大量研究表明，肿瘤复发、转移和耐药等生物学行为是由肿瘤的内部因素与特定肿瘤微环境的外部因素相互作用完成的。因此，如果能够找到并设计靶向治疗的靶点，改进肿瘤治疗策略，提高治疗效果具有重要意义。索拉非尼是首个用于全身治疗晚期肝癌的临床靶向分子靶向药物。研究表明，索拉非尼可显着抑制肝癌细胞的增殖。然而，所有患者最终都复发了，说明长期索拉非尼治疗显示出耐药特征。本研究首先建立了索拉非尼耐药的肝癌细胞系，然后通过基因表达谱芯片比较了Huh-7细胞和Huh-7-DR细胞的差异表达基因。结果表明，基因在Huh-7抗性细胞中的表达明显高于Huh-7亲本细胞，提示该基因可能在调节索拉非尼耐药中起重要作用。因此，本课题决心研究该基因在索拉非尼耐药肝癌细胞系中的作用及其潜在的分子机制。

目的：探讨基因在耐药肝癌细胞和肝癌细胞中的作用及潜在机制，为临床逆转肿瘤耐药转移提供理论依据。方法：采用间歇诱导法建立索拉非尼耐药肝癌细胞株Huh7-DR和PLC-DR。然后，利用RNA干扰技术下调153 kDa在肝癌耐药细胞系中的表达，研究其在索拉非尼耐药肝癌细胞侵袭转移中的作用，并进一步探索其参与的相关分子。在耐药细胞系的侵袭和转移中。机制。同时，利用RNA干扰技术下调肝癌细胞株Huh7和PLC中110 k Da的表达，并研究了110 k Da在肝癌细胞增殖中的作用。结果：本研究成功建立了一批耐受性良好且稳定的索拉非尼耐药细胞株Huh7-DR和PLC-DR，证实与对照细胞相比，索拉非尼耐药细胞具有以下特点：增殖缓慢，细胞克隆形成能力下降。此外，我们发现 153 kDa 剪接体和基因在耐药细胞中显着上调。更重要的是，与肝细胞癌的亲代细胞相比，索拉非尼耐药的肝细胞癌细胞获得了EMT表型和更强的侵袭能力，伴随着上皮样标志物E-、Zo-1等基因的显着增加。下调，

Lv-sh-(153 k Da)慢病毒载体下调基因表达促进MET在耐药细胞中的转化，同时上皮样标志物E-、Zo-1等基因显着上调，间充质样标志物显着下调。同时，Lv-sh-(110 kDa)慢病毒载体下调亲代细胞Huh7和PLC中110 kDa的表达，可有效抑制体内细胞增殖、克隆形成和致瘤性。结肝癌细胞增殖。