度维昔布在血液系统恶性肿瘤中的作用

杜韦利西布是一种口服有效的PI3K-δ和PI3K-γ双重抑制剂。体外研究表明，在没有肿瘤微环境的情况下，杜韦利西布治疗后原代人肿瘤BCLL细胞的活力降低。这些影响不大，但证明了内在PI3K信号在缺乏特定微环境信号的情况下在B细胞恶性肿瘤的存活中的作用。与许多靶向药物一样，侵袭性更强的淋巴瘤（包括弥漫性大B细胞淋巴瘤）的临床活性要低得多。我们推测这些侵袭性淋巴瘤在多个通路中具有异常信号，这些通路赋予细胞自主生长，并且较少依赖来自微环境的生存线索。这种不依赖外部生存信号的特点是细胞系。因此，将高通量细胞系筛选与杜韦利西布结合使用，我们试图确定靶向互补途径的药物，以确定可能更有效的联合方案。我们首先确定了杜韦利西布对一组细胞系的药活性。测试的20个细胞系中有14个显示出至少50%的最大生长抑制，以响应3天的杜韦利西布暴露，GI50中值为0.59μM.在DLBCL或转化的FL细胞系中观察到最大的敏感性，在MCL、MM或T细胞淋巴瘤系中观察到的活性较低。一个例外是皮肤T细胞淋巴瘤细胞系HH,它确实显示出相当大的敏感性（GI50=10nM）。活化的B细胞(ABC)与生发中心B细胞(GCB)DLBCL细胞系的敏感性没有一致的趋势，但测试的所有三种转化的FL细胞系对杜韦利西布都非常敏感。

　　为了鉴定可在这些相同细胞系中增强杜韦利西布活性的药剂，对30种与治疗恶性血液病相关的药剂进行了高通量组合筛选。这包括使用标准治疗药物治疗淋巴淋巴瘤（例如地塞米松、多柔比星、长春碱、苯丁酸氮芥和苯达莫司汀）、用于治疗淋巴淋巴瘤的新兴药物（例如万多克(ABT-199)、硼替佐米、卡非佐米、罗米地辛）和来那度胺）或靶向参与B细胞受体信号传导的蛋白质的药物，包括SYK（PRT062607）、BTK（依鲁替尼、spebrutinib）、PI3K/AKT/mTOR（依维莫司、AZD8055、GDC-0941、MK-2206和perifosine），PKCbeta（enzastaurin）和NF-kB（Bay11–7082和BMS345541）。杜韦利西布与地塞米松的组合活性明显高于其他标准护理剂，而与苯丁酸氮芥和多柔比星的组合活性较弱。其他DNA损伤剂如苯达莫司汀和长春碱显示出不太明显的影响，这一结果可能归因于细胞生长抑制或细胞毒性活性需要多轮DNA分裂才能完全显现的事实。总体而言，与标准护理药物观察到的组合活动令人鼓舞，当与组合药物方案CHOP（环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和泼尼松龙）的成分配对时，杜韦利西布将为B细胞恶性肿瘤患者带来益处。

　　对于筛选中的许多新兴药物，观察到了很强的联合活性和良好的活性广度。与venetoclax(ABT-199)的组合活性在DLBCL和转化的FL细胞系中最为显着，但在这些细胞系之间变化很大。敏感性与ABC或GCB淋巴瘤亚型或BCL2易位的存在或不存在没有明显关联。重要的是，该筛选包含两种蛋白酶体抑制剂（硼替佐米和卡非佐米）和两种BTK抑制剂（依鲁替尼和spebrutinib），它们显示出相似的协同模式。在进行大筛选时，具有影响相同目标/途径的多种化合物很重要，因为跨细胞系面板的共享组合活动模式有助于验证活动，并可以突出细胞系基因型或杜韦利西布的特定网络背景的重要性-诱导的组合活动。

　　为了更好地了解杜韦利西布与地塞米松或依鲁替尼联合观察到的强协同作用的机制，我们对单药治疗或杜韦利西布与这些药物联合治疗后的PI3K/AKT/mTOR信号通路进行了调查。杜韦利西布的连续治疗导致pAKT的初始抑制，并在12-24小时之间恢复。对PI3K或mTOR通路的各种抑制剂进行的分析表明，杜韦利西布治疗后AKT的重新激活取决于mTOR活性，更具体地说，取决于mTORC2的活性。相比之下，杜韦利西布与地塞米松或依鲁替尼的组合可防止mTORC2激活，导致下游mTOR信号的抑制。这包括抑制mTORC1信号传导效应pPRAS40、pP70S6K和pS6，以及通过阻止p4EBP1磷酸化来抑制帽依赖性翻译起始，导致c-MYC的丧失。重要的是，在联合治疗中观察到的下游mTOR信号抑制与增强的生长抑制和裂解PARP的诱导相关。此外，杜韦利西布不仅与地塞米松和依鲁替尼联合使用，而且与mTOR抑制剂依维莫司联合使用时也观察到显着的体内活性。有趣的是，在mTOR抑制剂依维莫司和AZD-8055的高通量筛选中也发现了体外协同作用。这些体外和体内发现不仅支持信号数据，而且证实了抑制mTOR通路的重要性，以便从杜韦利西布介导的PI3K-δ和PI3K-γ抑制中获得最大益处。

　　在多种淋巴瘤/骨髓瘤细胞系中使用杜韦利西布进行的这种高通量协同筛选的结果表明，多种药物在体外和体内均显示出显着的联合活性。这种协同作用在用杜韦利西布与依鲁替尼或地塞米松联合治疗的淋巴瘤细胞系中尤为显着。详细的生化分析显示，这些组合在长期接触杜韦利西布后抑制mTOR诱导的AKT再激活，阻止mTORC1和mTORC2介导的存活和生长信号。总体而言，这些研究提出了在针对侵袭性淋巴瘤的临床试验中将杜韦利西布与多种药物联合使用的科学依据，特别是指出了一种策略，其中包括抑制mTOR信号传导的药物，如地塞米松、依鲁替尼或依维莫司。如有需要，请咨询海外医疗医学顾问：或扫码添加下方微信，我们将竭诚为您服务！点击拓展阅读：杜韦利西布(DUVELISIB/COPIKTRA)可用于慢性淋巴细胞白血病和滤泡性淋巴瘤？

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