非小细胞肺癌的耐药性分析及克服耐药的方法

[摘要]： 研究背景：表皮生长因子-酪氨酸激酶抑制剂（-，EGFR-TKIs）针对非细胞肺（non-cell lung）患者表皮生长因子（EGFR）突变已成为靶点的重要成分之一的治疗。随着第一代和第二代EGFR-TKI在临床上的广泛应用，第三代EGFR-TKIs药物奥希替尼也日趋成熟。由于该药物可特异性抑制（+）EGFR突变，因此在前几代TKI中最初用于耐药的序贯治疗。最新研究表明，与吉非替尼和厄洛替尼相比，一线应用奥希替尼可显着延长EGFR阳性患者的无进展生存期（-free，PFS）。所以，FDA 和 EMA 还批准了奥希替尼用于 EGFR 阳性患者的一线治疗。与所有肺癌靶向治疗药物一样，继发耐药也是限制奥希替尼临床应用的瓶颈。已发现奥希替尼的耐药机制包括EGFR通路依赖性耐药和非EGFR通路依赖性耐药。前者最常见的耐药机制是突变，后者主要是指KRAS、BRAF等旁路途径。激活。已发现奥希替尼的耐药机制包括EGFR通路依赖性耐药和非EGFR通路依赖性耐药。前者最常见的耐药机制是突变，后者主要是指KRAS、BRAF等旁路途径。激活。已发现奥希替尼的耐药机制包括EGFR通路依赖性耐药和非EGFR通路依赖性耐药。前者最常见的耐药机制是突变，后者主要是指KRAS、BRAF等旁路途径。激活。

目前尚无公认有效的治疗奥希替尼耐药的方法。从肿瘤细胞的增殖、代谢、凋亡等方面探索其普遍耐药特征并进行干预是克服耐药策略的重要研究方向。我们的团队长期致力于研究克服肺癌靶向耐药性的联合治疗策略。此前的研究发现，经典的降糖药二甲双胍可以克服肺癌细胞对EGFR-TKI的继发耐药，干扰肺癌细胞的重要能量来源——自噬途径，也可以逆转其对靶向药物的耐药性。这提示肺癌细胞对EGFR-TKIs的继发耐药可能与其能量代谢有关。干扰肺癌细胞的代谢特征可能是克服奥希替尼耐药的可能途径之一。研究表明，奥希替尼可以抑制敏感肺癌细胞的糖酵解水平，与2-脱氧葡萄糖（2-,2-DG）联合使用可以增加突变肺癌细胞对阿法替尼的敏感性。但对奥希替尼继发耐药后肺癌细胞的代谢特征尚无相关研究。2-DG是否仍能在逆转奥希替尼耐药中发挥作用及其具体机制仍有待阐明和验证。本研究将对上述问题进行深入探讨，为克服奥希替尼耐药提供新的方法基础。目的：研究肺癌细胞对奥希替尼继发耐药后的代谢特征，阐明2-DG逆转奥希替尼继发耐药的作用及可能机制。方法：体外诱导法建立奥西替尼继发耐药肺癌细胞系-OR；采用MTT法、克隆形成实验、Ki67蛋白荧光染色、乳酸代谢测定法评价细胞系对奥希替尼的耐药性及耐药后的代谢特征；通过印迹、流式细胞术凋亡检测、乳酸代谢测定、

结果：1.对比奥赛替尼的继发耐药肺癌细胞系（-OR）和奥赛替尼敏感的肺癌细胞系（），细胞系-OR糖酵解水平显着升高，奥西替尼抑制糖酵解的能力被明显削弱。2.2-DG 可显着抑制细胞系-OR 的糖酵解水平，从而逆转其对奥希替尼的耐药性。3.奥西替尼联合2-DG诱导细胞系-OR凋亡能力增强，-OR促凋亡蛋白BIM表达上调，抗凋亡蛋白BCL-2表达下来了；干扰BIM的表达后，2-DG反向OR对奥希替尼耐药的影响减弱。结论：2-DG可逆转细胞对奥希替尼的继发耐药。