基于靶向NGS的劳拉替尼聚合酶链反应

时间：2022.01.24作者： 浏览次数：319

基于靶向NGS的劳拉替尼聚合酶链反应？为了确定患者的耐药机制，我们获得了肝损伤的活检标本，在患者接受劳拉替尼期间，肝损伤正在扩大，因此我们可以进行分子检测。FISH显示ALK重排，没有ALK扩增的迹象。因为MET被克唑替尼抑制，并被确定为对更具选择性的第二代ALK抑制剂的潜在抗性机制，我们进行了FISH以确定MET是否被扩增(即肿瘤DNA中有多个MET拷贝)。

没有观察到MET扩增。使用基于靶向NGS(称为Snapshot NGS)的聚合酶链反应(PCR)分析，我们确定了ALK激酶结构域的两个突变：C1156Y(之前在患者克唑替尼后活检中检测到)和L1198F。Snapshot NGS没有检测到38个癌症相关基因(如EGFR和KRAS)的其他突变。基于靶向NGS的劳拉替尼聚合酶链反应？劳拉蒂尼一个月多少钱？

ALK C1156Y是已知的克唑替尼耐药突变，而据报道，ALK L1198F是间变性甲状腺癌中的功能性获得性突变，它是一种布加替尼耐药突变，在具有核磷蛋白-ALK重排的细胞系中与F1174V结合。在女性肿瘤中发现了22个频率相似(分别为29%和35%)的C1156Y和L1198F突变，表明这两个突变位于ALK融合基因的同一等位基因上。

基于靶向NGS的劳拉替尼聚合酶链反应？为了验证这一点，我们从冷冻肿瘤标本提取的互补DNA中扩增EML4-ALK，将PCR产物亚克隆到pCR4-TOPO载体中，并对单个菌落进行测序。这两个突变位于同一等位基因上。接下来，我们对治疗前、克唑替尼治疗后疾病复发后和劳拉替尼治疗后疾病复发后肿瘤组织样本的整个外显子进行了测序。我们在对罗拉替尼耐药的样本中检测到一个双突变(ALK C1156Y-L1198F)，在对奈佐替尼耐药的样本中检测到一个单ALK C1156Y突变。ALK C1156Y在治疗前也在肿瘤中低频率检测到。携带ALK C1156Y的肿瘤细胞在预处理肿瘤中的比例低于7%，在克唑替尼耐药肿瘤中的比例约为50%，在劳拉替尼耐药肿瘤中的比例约为100%。在罗拉替尼耐药标本中仅检测到ALK L1198F突变。