本品高效液相色谱法测定甲苯磺酸索拉非尼含量和有关物质的方法

一种测定甲苯磺酸索拉非尼含量及有关物质的高效液相色谱法

【技术领域】

[0001] 本发明涉及药物分析领域，具体涉及一种高效液相色谱法测定甲苯磺酸索拉非尼含量及有关物质的方法。

【背景技术】

甲苯磺酸索拉非尼，英文名；索拉非尼是一种多激酶抑制剂，具有双重抗肿瘤活性，可抑制肿瘤增殖和血管生成。索拉非尼在人类肿瘤异种移植动物模型的临床前研究中表现出广泛的抗肿瘤活性并诱导肿瘤细胞凋亡，包括：肝细胞癌、肾癌、乳腺癌、结肠癌、胰腺癌和肺癌模型，并有效抑制肿瘤生长。甲苯磺酸索拉非尼是德国拜耳公司研发的新型抗癌药。它于2005年12月20日在美国首次获批上市，目前已在全球50多个国家获批用于治疗晚期肾细胞。癌症。本产品于2006年9月12日经国家食品药品监督管理局批准进口。规格为。

目前已有很多文献资料对甲苯磺酸索拉非尼的测定方法，对甲苯磺酸索拉非尼原料药的有关物质分析方法的研究也很少。2007年发明专利公布“4-{4-[({[4--3-()]})]}-N--2-的制备方法”（公开号.，2007年10月10日发表），提到4-{4-[({[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]氨基}羰基)制备氨基]苯氧基}-N-甲基吡啶-的HPLC纯度检测方法2-甲酰胺甲苯磺酸盐，在磷酸盐缓冲液-乙醇/乙腈=4/6体系下进行线性梯度洗脱。但对于甲苯磺酸索拉非尼的一些其他已知杂质，该方法无法实现分离和有效控制。

【发明内容】

[0004] 本发明的目的在于针对现有技术的不足，现提供一种高效液相色谱法测定甲苯磺酸索拉非尼含量及有关物质的方法。

为实现上述目的，本发明的技术方案是：一种高效液相色谱法测定甲苯磺酸索拉非尼含量的方法，其创新之处在于：所述色谱条件为：选用十八烷碱键合硅胶为填料，柱长为检测波长，柱温40℃，流速1.0ml/min；采用的检测器为紫外检测器；进行洗脱，流动相为三氟乙酸和极性有机溶剂的水溶液，三氟乙酸水溶液为A相，极性有机溶剂为B相，流动相中B相的有机溶剂为乙腈。

进一步地，所述A相三氟乙酸水溶液中三氟乙酸的浓度为0.1～1%。

进一步地，所述B相与A相混合体积比为45~55%。

进一步地，所述测定甲苯磺酸索拉非尼含量的具体操作步骤如下：(1)选用14mg甲苯磺酸索拉非尼，精密称量，置于量瓶中，加入流动相溶解稀释至刻度，摇匀，并作为供试品溶液；(2)另外取甲苯磺酸索拉非尼14mg，精密称重，置于量瓶中，配制成含索拉非尼浓度为0.1mg/ml，作为对照溶液；(3)分别称供试液和对照溶液10 μl，注入色谱仪，记录色谱图，用外标法以峰面积计算并折叠干燥，即得。

本发明的另一目的在于公开一种高效液相色谱法测定甲苯磺酸索拉非尼有关物质的方法，其创新之处在于：所述色谱条件为：选择以十八烷基键合硅胶为填料，柱长度，检测波长235 nm，柱温40℃，流速1.0 ml/min；所用检测器为紫外检测器；采用反相高效液相色谱进行梯度洗涤。流动相为三氟乙酸和极性有机溶剂的水溶液，三氟乙酸水溶液为A相，极性有机溶剂为B相，流动相中B相的有机溶剂为乙腈。

进一步地，所述A相三氟乙酸水溶液中三氟乙酸的浓度为0.1～1%。

进一步地，所述A相和B相的体积比根据梯度程序设定。

作为对比溶液；(6)取10 μl对照溶液注入液相色谱仪，调整检测灵敏度，使主成分色谱峰高为满量程的10～20%；(7)取供试液，每10 μl对照溶液注入液相色谱仪，记录色谱图。

本发明的有益效果如下：本发明采用了反相高效液相色谱法，通过制备供试品溶液和对照品溶液，分别量取供试品溶液和对照品溶液10μl，注入色谱仪，记录色谱图为按外标法计算峰面积并晒干，即完成甲苯磺酸索拉非尼等物质含量的检测，本发明填补了目前甲苯磺酸索拉非尼及相关物质含量的空白。检测分析方法不存在空白，甲苯磺酸索拉非尼及其杂质可通过乙腈-三氟乙酸水溶液体系分离，

【图纸说明】

图1 甲苯磺酸索拉非尼含量体系适应性。

图2 甲苯磺酸索拉非尼有关物质体系适应性。

图3为实施例1的色谱图。

图4为实施例2的色谱图。

【详细说明】

下面通过具体的具体实施例对本发明实施例进行说明，熟悉本技术的人员可以从本说明书公开的内容中容易地理解本发明的其他优点和效果。

实施例1 高效液相色谱法测定甲苯磺酸索拉非尼含量的具体操作步骤如下：(1)选用14mg甲苯磺酸索拉非尼，精密称重，置于量瓶中，加入流动相溶解并稀释至刻度，摇匀好，作为供试品溶液；（2)单独取甲苯磺酸索拉非尼14mg，配置为含索拉非尼浓度0.1mg/ml，作为参比溶液；（3) 分别量取供试品溶液和对照品溶液10μl，注入色谱仪，记录色谱图，用外标法计算峰面积，折叠至干，即得成品。

稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；(6) 取10 μl 对照溶液注入液相色谱仪，调整检测灵敏度，使主成分色谱峰高为满量程的10～20%；(7) 精确测量供测试每个10将微升产品溶液和对照溶液注入液相色谱仪，记录色谱图。

洗脱方法是按照梯度程序进行洗脱，具体如下表所示：

对甲苯磺酸索拉非尼测定方法的以下项目进行了验证： 1、系统适用性 甲苯磺酸索拉非尼用于分析色谱条件是否符合要求。从图1可以看出，在此条件下，各杂质与主峰和杂质的分离度均满足要求，峰纯度和单点阈值均满足要求。

标准曲线制备各浓度梯度的供试品溶液，精密量各10 μl，注入色谱仪，记录色谱图。以浓度（μg/ml）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标，绘制回归曲线，计算回归系数。从结果可以看出，本品含量测定在甲苯磺酸索拉非尼浓度50.23-150.7μg/ml的浓度范围内具有良好的线性。

重复性取6份样品，分别精密称量，采用高效液相色谱法测定，考察了测定法的重复性。从结果可以看出，采用高效液相色谱法测定本品含量，具有良好的重复性。

，取甲苯磺酸索拉非尼约14mg，共9份，精密称定，置量瓶中，分别取甲苯磺酸索拉非尼对照品3份8mg、10mg、12mg置于上述容量瓶中，加流动相溶解稀释至标记，摇匀，作为80%、100%、120%试液使用。根据高效液相色谱法测定含量，计算测定量和回收率。从结果可以看出，该产品的含量测定采用高效液相色谱法的回收率良好。

5、溶液稳定性 取测定本品含量的试验溶液，分别在0、1、2、4、6、< @8、 12、 24小时进样，采用液相法含量测定，考察本品溶液稳定性。从结果可以看出，本产品含量测定的高效液相色谱溶液在24小时内稳定。CN A 手册 5/9 页

，中间精度为具有重复性结果的中间精度数据组1，实验结果分别为中间精度数据组2