非编码RNA(UCA1)来介导癌症进展中的细胞间串扰

概括

外泌体可以通过传递长的非编码 RNA 来介导癌症进展中的细胞间串扰。本研究旨在探讨尿路上皮癌相关基因（UCA1)）在非小细胞肺癌（）对吉非替尼耐药中的作用。

研究成果

图 1：UCA1 在 643 例吉非替尼耐药的非小细胞肺癌中优先上调。

(A) 来自 TCGA RCC 数据集的 644 个正常样本和肺癌组织中的 UCA1 表达。

(B) UCA1 645 在 646 名患者的敏感组 (n=40) 和耐药组 (n=48)) 中的相对表达；(C) UCA1 在一组 647 个细胞系中的相对表达 (D ) 从 TCGA RCC 数据集分析了 955 例肺癌 649 患者中 UCA1 表达与总生存率之间的相关性 648。使用对数秩检验计算 650 例患者的 p 值。

所有测试至少进行了 3 次。数据 651 表示为平均值±标准偏差。**P

图 2：细胞衍生外泌体的表征。

(A) Exo/ 和 Exo/ 的 TEM 图像。

(B) 外泌体标记 CD63、、Exo/ 和 Exo/ 的分析。

(C) 细胞及其分泌外泌体中 UCA1 表达的定量 RT-PCR 分析。

(D) 提取的血清外泌体中可检测到UCA1的表达，吉非替尼耐药组的表达高于吉非替尼敏感组。

(E) 合格的注册吨位。提取外泌体或 PBS 处理后的细胞内 UCA1 表达水平的 PCR 分析和 PC9 细胞 48 小时 (F) 与外泌体共培养的吉非替尼敏感受体细胞产生的细胞死亡抑制浓度比没有外泌体受体细胞的高 50%。所有测试至少进行了 3 次。数据表示为平均值±标准偏差。**P

图3：UCA1对非小细胞肺癌667细胞增殖和凋亡的影响。

(A) 用 UCA1 转染 48 小时的细胞 668 中 UCA1 的 qRT-PCR 分析。

(B) UCA1 669 在 48 小时转染或-UCA1 和 PC9 细胞中的 qRT-PCR 分析。

(C) CCK8 测定表明，UCA1 沉默 671 在 1 μM 672 存在下抑制细胞增殖。

(D) CCK8 测定表明，UCA1 在 1 μM 吉非替尼存在下促进 PC9 细胞增殖。

(E) 在 0.1 µM 吉非替尼处理 36 小时之前，用 si- 或 si-UCA1 转染细胞的细胞凋亡的流式细胞术分析。

(F) 处理 36 小时前 PC9 和用或 -UCA1 转染的细胞的细胞凋亡的流式细胞术分析。

(G) CCK8 测定表明，UCA1 在 1 μM 吉非替尼存在下促进 PC9 细胞增殖。

(H) 用 si- 或 si-UCA1 转染的细胞在 0.1µM 吉非替尼处理 36h 前细胞凋亡的流式细胞术分析；数据表示为平均值±标准差，**P

图 4：UCA1 基因的敲除增强了体内吉非替尼的敏感性。

(A) 裸鼠肿瘤体积曲线分析。

(B) 裸鼠肿瘤重量的测量。

(C) sh-UCA1+组Ki67阳性细胞增殖率低于LV-NC+组。**P

图 5：UCA1 在细胞中充当 miR-143 的分子海绵。

(A) v2.0结果表明UCA1序列具有高度保守的miR-143结合位点。

(B) 与阴性对照相比，模拟 miR-143 的 WT-UCA1 荧光素酶报告载体的荧光素酶活性显着降低，而模拟 miR-143 对转染 mut-UCA1 的荧光素酶活性没有任何影响细胞。

(C) UCA1 和 miR-143 都存在于反义 AGO2 沉淀产物中。

(E) miR-143 在一组非小细胞肺癌细胞系中的相对表达；所有测定至少进行 3 次。数据表示为平均值±标准偏差，**P

综上所述

我们还发现 miR-143 通过调节表达发挥其作用。总之，我们的研究结果表明，外泌体 UCA1 可能是治疗 EGFR + 患者的有希望的治疗靶点。

DOI：10.1016/j.omtn.2019.10.047

参考

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