一聊贝伐单抗生物类似药肽图分析技术方法，你知道吗？

使用 Q-TOF 质谱法表征和分析贝伐单抗生物类似物抗体

它是一种重组人源化人血管内皮生长因子 (VEGF) 单克隆抗体。作为美国第一个获批的抑制肿瘤血管生成的药物，可用于治疗转移性结直肠癌和非鳞状非小细胞肺癌。. 在中国，有10多个贝伐单抗生物类似药正在研发和上市。面对生物仿制药的分析，他们充满了技术挑战。贝伐单抗生物仿制药的表征是质量控制的关键点之一。抗体肽图分析方法尤为关键。今天我们就来聊聊贝伐单抗生物类似药的肽图分析方法。

肽图分析()是研究抗体药物结构和组成的重要技术之一。抗体经限制性内切酶消化后，通过层析和岛津高分辨Q-TOF质谱LCMS-9030进行分析，不仅可以分析蛋白质的氨基酸序列，还可以分析蛋白质的翻译修饰（PTM）可以分析相应的肽。不同性质的肽段采用岛津反相高效液相色谱法分离，后续肽段采用高分辨质谱进行一级扫描和二级扫描。监测的母离子和产物离子用于匹配相应的肽氨基酸序列和现有修饰。肽图分析是抗体蛋白药物质量控制的重要方法。岛津高分辨质谱可以完成所有相关的分析检测项目。

分析仪器及色谱柱解决方案

01 分析仪器

LCMS-9030

LCMS-9030 四极杆飞行时间质谱仪将高速和高灵敏度四极杆质谱与 TOF 技术相结合。融合岛津先进工程技术的DNA，打造出速度与性能兼备的新一代高分辨率质谱仪，以优异的性能轻松应对定性和定量分析的挑战。

02 液相色谱柱

Shim-pack GISS-HP, 3um, 150*3.0 mm

● 反相多肽分析专用色谱柱

● 寿命长、耐压高、峰值输出稳定

应用

以生物类似药为例，分析时，抗体蛋白经胰蛋白酶消化，反相色谱质谱分离，然后进入高分辨Q-TOF质谱进行初级全扫描和二级扫描，高分辨率数据提取分析匹配对应肽段序列的完整序列如下图所示。

数字。使用岛津 LCMS-9030 抗体进行测序的基本步骤和示例

岛津分析生物类似药的序列分析，通过Shim-pack GISS-HP色谱柱（3um, 150*3.0 mm），可高效分离消化后的轻链和重链肽段，最后使用LC-MS 9030 进行一级和二级扫描，色谱质谱参数的优化参数如下表所示。

数字。岛津LCMS-9030抗体测序详细参数

通过高分辨率数据的软件分析，再匹配生物类似药的重链和轻链序列，完成整个抗体的肽图分析。由于篇幅有限，采用重链肽段序列的部分数据进行展示，匹配覆盖率为100%，可见岛津LCMS-9030 Q-TOF质谱在抗体肽段分析方面具有很强的实力。部分序列分析结果如下图所示。

数字。生物类似药重链测序结果展示（部分展示）

结合上述案例，岛津建立了高分辨质谱LCMS-9030完整的抗体药物肽图分析策略。此外，对于分子量分析、翻译修饰、二硫键分析和糖基化分析，LCMS-9030可以完成所有相关的抗体。对药品关键质量属性的检测，可以为用户节约能源、提高效率，创造更大的价值。