奥沙利替尼与奥沙利铂联合应用于肺癌治疗的基础研究

【摘要】：肺癌是目前我国发病率和死亡率居首位的恶性肿瘤。综合治疗在肺癌的治疗中发挥着越来越重要的作用。重大进展之一是分子靶向治疗药物的成功应用。吉非替尼是一种口服活性和选择性表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂。2003年被美国FDA批准用于治疗晚期非小细胞肺癌。它已成为肺癌的分子靶向治疗。国内比较成熟的药物。临床研究表明，吉非替尼单药治疗肺癌的有效率仅为10%-20%，因此人们希望与化疗药物联合使用，进一步提高抗肿瘤效果。奥沙利铂是第三代铂类化合物，常用于治疗肺癌。为此，我们开展了吉非替尼与奥沙利铂联合应用治疗肺癌的基础研究，并评价了吉非替尼与奥沙利铂不同序贯方案对人肺癌细胞A549的抗肿瘤作用，以期为吉非替尼的合理临床应用提供了必要的实验依据和依据。本研究包括三部分：（1)吉非替尼与奥沙利铂不同序贯方案的体外杀伤效果观察；（2)吉非替尼与奥沙利铂不同序贯方案）体内抗肿瘤评价协议的效果；(3) 吉非替尼和奥沙利铂不同序贯方案的抗肿瘤机制。首先，我们通过MTT细胞杀伤实验观察了吉非替尼单药对人肺癌细胞A549的体外杀伤作用。将不同浓度梯度的吉非替尼或奥沙利铂应用于A549细胞，作用24、48、72小时后，测定药物对细胞的抑制率，半抑制浓度（计算 IC50 值）。

结果表明，吉非替尼和奥沙利铂对A549细胞的杀伤作用呈剂量依赖性和时间依赖性。其中，吉非替尼单药作用24、48、72小时IC50值为92.3±3.10μmol/L，3< @2. 5±1.05μmol/L，5.21±0.80μmol/L，作用72小时的IC50值接近作用24小时的1/20行动。奥沙利铂单药24、48、的72小时IC50值为1.21±0.03μmol/L和0.64±0.05μmol/L，0.23±0.02μmol/L，作用72小时的IC50值接近作用24小时的1/6。根据以上结果，我们进一步观察了吉非替尼和奥沙利铂在不同顺序程序中对 A549 细胞的联合杀伤作用。吉非替尼和奥沙利铂的序贯方案设置如下：三组：奥沙利铂24小时和吉非替尼72小时，奥沙利铂+吉非替尼24小时，吉非替尼在吉非替尼前48小时和72小时，随后奥沙利铂24小时；三组的IC50值为3.20±0.01μmol/L、6.18±0.02μmol/L和8.41±< @0.01μmol/L。三组序贯方案的综合指数（CI值）结果为：（1)奥沙利铂24小时后吉非替尼72小时组CI值小于1，说明两者药物具有协同作用；（2)24 小时后首先使用奥沙利铂 + 吉非替尼，吉非替尼48小时组CI值接近1，两种药物接近相加作用；（3)香格非替尼72 1小时后，24小时组奥沙利铂CI值大于1，两药间存在拮抗作用。

以上结果说明吉非替尼与奥沙利铂合理序贯给药可发挥协同作用。其次，为了证实上述体外结果，我们建立了裸鼠异种移植模型，以评估吉非替尼和奥沙利铂不同序贯方案在体内的抗肿瘤作用。A549细胞以2×107个细胞/只皮下接种BALB/C裸鼠，分为6个剂量方案进行治疗：（1)对照组；（2)奥沙利铂组；（3)吉非替尼组；(4)奥沙利铂先与吉非替尼组；(5)吉非替尼组后联合；(6)先机 奥沙利铂组中奥沙利铂后，体重变化，肿瘤体积生长曲线连续35天测量裸鼠肿瘤重量。结果显示，奥沙利铂后吉非替尼组裸鼠体重增加与吉非替尼组相似。与其他组相比，无统计学差异（P0.05)。奥沙利铂后吉非替尼组肿瘤生长最慢，抑瘤率为58.9 %(P0.05)。以上体内实验结果表明，吉非替尼与奥沙利铂联用并未增加药物的毒性。移植瘤具有较强的抑制作用。最后，为了为探讨吉非替尼与奥沙利铂联合用药的作用机制，我们采用流式细胞术检测不同联合用药后A549细胞的发生和凋亡情况，以及细胞周期分布。

奥沙利铂组主要阻断S期A549细胞（70.0%）；吉非替尼组主要阻断G0/G1期细胞（40.3%）。奥沙利铂后，吉非替尼组G2/M期细胞数较其他治疗组显着增加，达到37.9%(P0.05);和先集 奥沙利铂组和吉非替尼组联合使用后 G0/G1 细胞略高于对照组，分别为 34.4%(P=0. 35), 36.3%(P=0.24)。以上结果表明奥沙利铂后吉非替尼序贯程序具有较高的凋亡率。奥沙利铂继以吉非替尼的顺序方案可阻断 G2/M 期的细胞，干扰受损细胞的修复，并维持奥沙利铂诱导的细胞凋亡。吉非替尼同时或在奥沙利铂给药之前仅增加G0/G1期细胞的比率，从而削弱随后奥沙利铂的作用。基于以上结果，我们认为吉非替尼与奥沙利铂联合使用的体内和体外抗肿瘤作用是依赖于方案的。奥沙利铂序贯吉非替尼的序贯方案具有较强的抗肿瘤作用，其机制可能与抑制化疗后肿瘤细胞的损伤修复和维持化疗诱导的细胞凋亡有关。死亡效果是相关的。