：索拉非尼是治疗进展期原发性肝癌的多靶点抑制剂

索拉非尼诱导肝癌细胞凋亡信号通路的研究进展 张超亚 赵祥轩 卢再明 郭启勇（中国医科大学附属盛京医院放射科，沉阳）有效提高晚期原发性肝癌患者的无进展生存期和总生存期。其在肝癌靶向治疗中的应用已成为当前的研究热点。信号通路包括Raf/Mek/Erk、Jak/Stat、PI3K/Akt/mTOR、血管内皮生长因子受体和血小板衍生生长因子、STAT、、Wnt/β-、自噬溶酶体和肿瘤相关的这些靶点，可以调节肝癌细胞的增殖、分化、转移和凋亡。本文主要回顾了索拉非尼作用的这些靶点或信号通路的研究现状，为进一步的索拉非尼临床研究提供有益线索。关键词：肝肿瘤；索拉非尼；细胞凋亡;信号转导; 7 文献代码：A 文章编号：1001-5256 (2016)04-0816-05R in-in, ZHAO, LU, et al. (of R, ,,): , is the- for the of,并且可以-free 和in with . 中的of 有一个hot . or Raf/Mek/Erk, Jak/Stat, PI3K/Akt/mTOR, and , STAT, RNA, Wnt/β - ,, and - , and can pro-,,, and of ．this the of on or to for on ．Key : ;;; 2015 -09 -15; 修订日期: 2015 -11 -09.

资助单位：国家自然科学基金委（，）；辽宁省自然科学基金（ ） 作者简介：张超亚（1989- ），男，主要从事介入治疗和放射诊断研究。通讯作者: 赵祥轩, E-mail: @sj － ．组织；陆再明，E-mail：luzm@sj-。组织。索拉非尼是目前唯一获批用于治疗晚期肝癌的多靶点药物，在临床上得到广泛应用。益处。索拉非尼诱导肝癌细胞凋亡的信号通路复杂。本文介绍了文献中普遍报道的信号通路。 1 Ras/Raf/Mek/激酶及其介导的Raf/Mek/Erk通路在肿瘤细胞的分裂、分化、增殖、转移和凋亡中发挥重要作用。 Raf/Mek/Erk信号转导通路存在于所有真核细胞中，通过Raf/Mek/Erk的特异性级联磷酸化将信号传递到细胞核中。研究[1]表明，在大多数肝癌患者中，Raf激酶过度表达，而HBV或HCV感染等常见肝癌致病因素可激活Raf/Mek/Erk信号通路。

Raf家族成员有3种类型：A-Raf、B-Raf和Raf-1，等[2]表明Raf-1酶在肝硬化和肝癌患者中高表达，B-在 30% 的肝癌患者中发现了 Raf。基因有突变。并且等[3]证实索拉非尼（BAY 43-9006)可以特异性抑制Raf-1（IC 50 , 6 nmol/L）和B-Raf（IC 50 , 22 nmol/L），从而抑制Ras/Raf/Mek/Erk 的级联效应，而不是特异性抑制 Mek-1 和 Erk-1 (IC 50 , >10 000 nmol/L)。2006 年 Liu 等 [4] 发现在 PLC /PRF /5和细胞系，索拉非尼（15 μmol/L）可使实验组阳性细胞比例分别增加到16. 4%和12. 0%，而对照细胞系仅1.8%和1.2%的阳性细胞在培养基中，说明适量的索拉非尼可以显着增加肝癌细胞的凋亡。索拉非尼作为多靶点抑制剂，已被证明在多种肿瘤临床前模型中均有效，2012年Mao等人[5]发现在肺癌（A549)、宫颈癌（HeLa）和肝癌细胞（））中，索拉非尼抑制三种细胞线最高分别达到 88%、78% 和 94% .

最近的一项研究[6]发现，在54例病理证实的肝癌患者中，口服索拉非尼，，每天两次，连续4周，免疫组化测定，高浓度磷酸化Erk患者的肿瘤进展时间显着延长（5.1个月vs 2.5个月），并且已经证实索拉非尼可以通过抑制Raf/Ras通路来抑制Erk的磷酸化，完全是6 1 8 of 。第 32 卷 2016 年 4 月 4 日 《临床医学杂志》，第 4 卷。 32 No. 4, Apr. 2016显示索拉非尼通过抑制Ras/Raf/Mek/Erk通路作用于肝癌细胞，抑制肿瘤细胞增殖，延长肝癌患者肿瘤进展时间。 2 PI3K/Akt/mTOR PI3K/Akt/mTOR信号通路在许多肿瘤的发生发展中起着至关重要的作用，控制着细胞生理、细胞周期和血管生成的调控[7]。该信号通路的激活也是肿瘤患者预后的重要指标之一。因此，该通路成为肿瘤靶向治疗的研究热点。针对这一信号通路的临床靶向药物很多，其中mTOR特异性抑制药物。雷帕霉素及其衍生物已用于临床。在肝癌患者中，PI3K/Akt/mTOR信号通路通常发生改变，近半数肝癌患者PTEN基因表达产物减少甚至缺失（PTEN是一种抑癌基因）。

索拉非尼不直接抑制 PI3K/Akt/mTOR 信号通路，但仅轻微抑制 S6K 的磷酸化（S6K 是 mTOR 的下游底物）。相反，索拉非尼可以刺激Akt/mTOR的磷酸化。等 [8] 表明，索拉非尼使 mTOR 和 AKT 磷酸化分别增加约 17% 和 41%，并且该信号通路与 Ras/Raf/Mek/Erk 信号通路之间存在相互作用。 PI-103 (Akt/mTOR ) 可以显着抑制 Huh7 细胞系的生长。另一项研究[9]发现PI3K/Akt/mTOR信号通路在索拉非尼耐药肝癌中发挥重要作用。有趣的是，最近的一项研究 [10] 发现，在 SMMC-7721 肝癌细胞中，分别在使用或不使用 4 μmol/L 索拉非尼 48 小时后测量细胞中的 PI3K、mTOR、AKT 蛋白和 mRNA 水平。发现索拉非尼治疗组细胞中PI3K/Akt/mTOR水平明显升高。表达显着降低，表明索拉非尼对肝癌生长的抑制作用是通过下调PI3K/Akt/mTOR信号通路介导的。因此，PI3K/Akt/mTOR信号通路在索拉非尼诱导肝癌细胞凋亡的机制中仍存在争议。

3 血管内皮生长因子受体( , ) 和血小板衍生生长因子( , ) 和信号通路在肝癌血管生成和肝癌转移过程中发挥重要作用。 ——2、-3和β，这些受体位于内皮细胞的细胞膜上，可以激活下游的Ras/Raf/Mek/Erk信号通路，调节血管和淋巴管的形成[ 11]。肝细胞癌多为血供丰富的实体瘤，内含丰富的新肿瘤血管。大多数肝癌患者的 和 表达上调。血清VEGF水平是影响肝癌患者预后的重要因素[12]。 Chu等[13]发现93例肝癌患者中，-2高表达80例，β高表达18例，分别约占HCC患者的86%和19.9%。 4%。等 [14] 报道，在 WT CALU-3 和细胞系中，用索拉非尼治疗可以阻断 和 信号通路并显着抑制细胞增殖。 [15]表明阻断和信号通路可以诱导血管内皮细胞凋亡，从而抑制肿瘤血管的生长，达到治疗肿瘤的效果。

刘等人。 [4] 也进行了类似的实验。当索拉非尼浓度为30 mg/kg或100 mg/kg时，他们发现PLC/PRF/5肿瘤细胞系的移植对CD34更为敏感。微血管的面积显着减少。这些研究表明，索拉非尼通过和信号通路作用于肝癌新生血管的内皮细胞，诱导其凋亡，抑制肿瘤血管的形成，减少癌组织的血供，使肿瘤细胞死亡缺血和缺氧。达到治疗目的。 4 STAT 信号转导和转录激活因子 STAT 蛋白家族是一组调节各种细胞因子、生长因子和信号传递，并介导细胞增殖、分化、迁移、凋亡和免疫调节等多种生物学反应的蛋白质。包括 7 个结构相似的成员 (,,,,,,,)。 STAT信号转导通路在肝癌的发生发展中起重要作用。有学者[16]发现，60%的肝癌样本在大量肝癌组织样本中高表达，而另一些研究[17-18]证实，人肝癌组织中、肝癌的活化水平显着高于癌旁组织，高表达蛋白与肝癌的病理分级和临床分期呈正相关。作为一种多靶点抑制剂，索拉非尼可通过 STAT 通路抑制肝癌。泰等人。 [19]发现它是索拉非尼治疗肝癌的主要靶点。磷酸化的抑制在索拉非尼诱导的肝癌中很重要。它在细胞凋亡过程中起重要作用。索拉非尼治疗前加入白细胞介素624 h使Sk-Hep1肝癌细胞系达到最高表达水平，再加入索拉非尼24 h。 h, 结果表明索拉非尼可显着降低活性。

顾等人。 [20]也表达了类似观点，提出索拉非尼通过阻断信号通路来抑制肝癌的生长和转移。国内学者[21]也有相关研究，适当剂量的索拉非尼可在一段时间后抑制磷酸化，而与YC-1（一种鸟苷酸环化酶激动剂）合用可显着抑制磷酸化。 ，并在肿瘤异种移植模型中，可抑制肿瘤细胞增殖并诱导细胞凋亡。 5 (RNA, ) 是一系列非编码的内源性小RNA，可与靶基因3'端的非转录区结合，导致mRNA下调或阻断mRNA的转录[22]。 在肝癌的发生发展中发挥着重要作用，与肝癌的早期诊断、癌细胞的侵袭、转移、凋亡以及肝癌患者的预后和生存密切相关[23]。 -24]。越来越多的研究[25]表明肝细胞癌组织中存在mRNA的异常表达，其中miR-17-5p、miR-143、miR-151、@的表达上调。 >miR-181b、miR-21、@>miR-221/222、miR-224、miR-602等，表达下调的是miR-1、@ >miR -101、@> miR-124、miR-195、miR-203、miR-223、miR-23b, miR-29、miR-375等

作为唯一获批的多靶点抑制剂，索拉非尼还可以作用于mRNA，诱导其表达突变，从而达到基因水平治疗肝癌的效果。白等人。 [26]发现，与正常肝组织相比，肝癌组织中miR-122的表达下调，miR-122可显着抑制肝癌细胞株的生长。与对照组相比，索拉非尼治疗后miR-122的表达明显降低。肝癌细胞的存活时间显着缩短，染色显示用索拉非尼处理的表达miR-122的肝癌细胞中凋亡细胞增加了35%。等[27]也进行了类似的实验研究，在联合索拉非尼治疗后，联合miR-193a治疗后，肝癌细胞718增殖率明显下降，张超亚等。索拉非尼诱导肝癌细胞凋亡信号通路的研究进展可抑制72%。最近的一项研究[28]表明，miR-425-3p的表达可以作为预测晚期肝癌患者对索拉非尼治疗反应的指标之一。在HuH-7和肝癌细胞系中，miR-425-3p水平较高的对索拉非尼治疗反应较好，为肝癌患者选择索拉非尼治疗方案提供了一定的参考价值。 6 Wnt/β - 该通路是经典的Wnt通路，是生物进化中非常保守的通路。

当Wnt信号通路被激活时，细胞质中的β-逐渐积累，当浓度积累到一定水平时，β-开始转移到细胞核，作用于细胞核内下游的靶基因，导致细胞增殖异常[29]。 Wnt/β-信号通路与肝癌的发生、转移、侵袭以及肿瘤血管的形成密切相关。 Cui等[30]发现β-在正常细胞的细胞核中不表达，但在肝癌组织的细胞质或细胞核中表达高达61.61。 8%。 Wei等[31]研究表明，在顺铂耐药的Huh7肝癌细胞中，β-的浓度高于正常的Huh7肝癌细胞系，而索拉非尼可特异性抑制上述两种细胞系中的Wnt/β。 － 信号通路，索拉非尼与顺铂合用较单用顺铂可减少细胞内β-蓄积。细胞杀伤。等[32]发现索拉非尼可以在体内或体外改变Wnt信号通路，利用免疫细胞荧光技术表明索拉非尼可以阻止氯化锂处理的Huh7细胞中β-转移到细胞核中，同时，还可以降低细胞中β-的总含量。

在实验动物模型中，索拉非尼可分别减少肝脏相关的 Wnt 基因 GLUL、LCR5 和 TBX3。在肝癌细胞小鼠模型中，索拉非尼治疗可以减少模型中的肿瘤体积，同时延长小鼠的中位生存期（从22 d到34 d），这充分说明Wnt/β-信号通路发挥着非常重要的作用。索拉非尼在肝癌治疗中的重要作用。此外，Wnt/β-信号通路与 Ras/Raf/Mek/Erk 和 PI3K/Akt/mTOR 等信号通路之间存在相互作用。这些信号通路相互连接，形成复杂的调控网络，影响肝癌的发生发展。 7 自噬溶酶体 自噬溶酶体广泛存在于正常细胞中，其底物是细胞内退化、受损或老化的细胞器或细胞质，在细胞中起“清道夫”的作用。越来越多的证据表明，自噬溶酶体在致癌、肿瘤增殖和化学抗性中起重要作用。最近的研究 [33] 表明，自噬的调节可能成为一种新的癌症治疗方法。等[34]发现Huh7肝癌细胞系中肝癌细胞对索拉非尼的耐药性明显高于Huh7肝癌细胞。细胞内索拉非尼介导的自噬-溶酶体含量显着增加，同时细胞内腺苷酸活化蛋白激酶的磷酸化增加，随后形成自噬，表明索拉非尼治疗肝癌与自噬酶信号通路有关。另一项研究[35]也发现了类似的结果，在体外Huh7肝癌细胞中，索拉非尼可以增加细胞内自噬-溶酶体的积累，而不是抑制其降解，而抑制自噬-溶酶体可以增加...