奥希替融合在egfr突变细胞系模型中的功能意义(图)

奥希替尼是一种高选择性、穿透 CNS 的第三代表皮生长因子 (egfr) 酪氨酸激酶抑制剂 (TKI)，与第一代相比，无进展生存期 (pfs) 提高了近一倍，现已成为标准一线egfr 突变非小细胞肺癌 () 的治疗。此外，奥希替尼仍然是治疗介导的第一代/第二代的首选二线疗法。尽管初始反应率很高，但患者通常在治疗 1-2 年后发展为获得性病症。奥希替尼耐药的机制是什么？

奥希替尼耐药机制正在积极研究中，但到目前为止主要是在二线阳性环境中，因为一线患者的使用代表了治疗范式的最新转变。先前的研究表明，对奥希替尼和第一代/第二代耐药的重叠机制，包括通路激活（例如，met 扩增）和所有类型 egfr 抑制剂进展时的组织学转化。

一个值得注意的例外是突变，它发生在 50-60% 的使用旧药物的患者中，并且是敏感性的标志。此外，基于药物的受体结合特性，预计会出现奥希替尼耐药性，但不会对第一代药物产生耐药性。然而，迄今为止报告的奥希替尼耐药病例数量仍然有限，并且很大一部分奥希替尼耐药病例缺乏明确的驱动耐药途径。最近在少数进展为奥希替尼和其他患者的患者中报告了 4 例获得性融合，包括涉及 ret 的融合。

从历史上看，抗性研究尚未确定基因融合，但这可能是由于使用了可能不包括基因融合的有限基因分型平台。涉及 ret 的融合是最近描述的非小细胞肺癌中的致癌基因，使用标准的下一代测序 (ngs) 平台可能难以检测到。为了探索奥希替尼耐药机制，包括获得性融合改变，我们分析了一组进展为奥希替尼的患者的肿瘤组织或循环肿瘤 DNA()。我们还评估了 ret 融合在 egfr 突变细胞系模型中的功能意义，并治疗了 3 名 egfr 突变 患者，并结合 egfr 和 ret 抑制获得了 ret 融合。

我们的研究始于对马萨诸塞州总医院患者奥希替尼耐药机制的调查。在 2014 年 7 月至 2018 年 8 月期间，共有 41 名 egfr 突变患者接受了奥希替尼单药治疗并进行了耐药性评估。有 26 名女性和 15 名男性，中位年龄为 64 岁（范围 40-87 岁）。1名患者接受了一线奥希替尼治疗，16名患者接受了二线治疗，24名患者接受了三线或以上治疗。除一线患者外，所有患者均患有 790m 阳性疾病。

15例患者在奥希替尼之前接受了第三代治疗（12)，（2)，（1)）。奥希替尼治疗的中位持续时间为11.6个月（范围< @1.0ー32.7).为评估奥希替尼耐药机制，17例患者同时进行组织活检和分析，15例患者仅有组织，9例患者仅有临床进展。3例患者对奥希替尼耐药性进行了两种不同的转移。

奥希替尼耐药机制分析：对 32 名奥希替尼耐药患者中的 35 名进行了组织活检分析。他们在奥希替尼之前都有腺癌组织学，两个在奥希替尼进展后转化为小细胞肺癌 (sclc)，一个转化为鳞状细胞组织学。在所有病例中都进行了分子检测，并在每个样本中检测到了始祖 egfr 突变。获得了 6 名 (19%) 患者，每名患者均为顺式构型，7 名 (22%) 患者获得了 meta 扩增。在 12 例 (38%) 病例中，未发现（11 例先前阳性）或其他耐药驱动因素，而 3 例 (9%) 病例保持不变，未发现耐药机制。

在分析的 26 名奥希替尼耐药患者中，22 份样本中检测到创始人 egfr 突变，其余 4 名未检测到 egfr，因此没有提供有关耐药机制的信息，这也可能低于检测限。检测到的抗性机制类似于 7 (32%) 和 5 (23%) 的抗性曲线遇到扩增（血浆拷贝数≥2.1) 组织样本。对于有意义的一致性分析，数量包含组织和信息的样本太少，我们观察到三名患者的肿瘤间异质性，他们都有两个不同的转移灶。两名患者在一个转移部位检测到 c797，而另一名患者是 c797 野生型; 在第三位患者的胸腔积液细胞块中检测到扩增，

奥希替尼耐药的机制是什么？在第二次活检中，没有发现其他可能的耐药机制。在一名患者的血浆中仅检测到奥希替尼耐药，在 (, maf, 14.2%）。鉴于这一发现，我们使用 mgh 固体融合测定 (SFA)，一种基于 RNA 的锚定多重聚合酶链反应 (AMP) 来识别组织活检中的融合事件，并发现 24/35 (69%) 奥希替尼耐药的组织活检具有足够的组织进行分析。其中，我们在患者 1 的进行性胸膜转移和患者 2 的新肝脏中发现 -braf 转移中存在融合。

此外，我们的奥希替尼耐药队列中的患者 3 在基础医学部接受了 NGS 治疗以发现一个生长的网膜结节，并观察到 ​​agk-braf 融合。为了扩大具有获得性融合事件的 EGFR 突变患者的队列，我们​​回顾性地对过去 10 年在 MGH 获得的 EGFR 突变组织活检进行了 SFA。许多较旧的活检是在厄洛替尼、阿法替尼和吉非替尼的基础上进行的，并且最初没有进行 SFA。

其中，我们确定了另外一名接受了-ret融合的耐药患者，以及另一名在化疗/奥希替尼进展后接受了-braf融合的患者。我们还包括一名来自加州大学欧文分校 (uci) 的患者，该患者在一线/治疗进展后在基础和 ngs 组织测试中获得了 -RET 融合。

接下来，我们试图确定在上述患者中观察到的基因融合是否足以引起获得性耐药。我们最初专注于 -ret 融合基因。慢病毒感染 pc9() 和 (/) 细胞以分别获得-ret 表达细胞系。在没有EGFR抑制剂的情况下，表达-RET的细胞与亲代细胞相似地生长。奥希替尼治疗后，-ret和-ret细胞继续增殖，而亲代细胞的细胞活力明显下降。

结果表明，在奥希替尼中表达-RET的细胞的增殖率显着降低，这表明RET激活并不能完全补偿EGFR信号传导的损失，尽管它足以驱动获得性耐药。我们接下来研究了 -ret 表达对细胞中 PC9 和下游信号通路激活的影响。与不表达可检测到的ret蛋白的亲代细胞相比，在-ret和-ret细胞中都检测到磷酸化的ret。单独的 -ret 表达不会导致下游 mapk(-erk1/2) 或 pi3k(-akt) 信号在基线时的激活增加，但在 -ret 和 -ret 中存在或存在 erk1/2 和 akt 的情况下细胞磷酸化仍然存在。因此，-ret 融合的表达足以在 egfr 突变的非小细胞肺癌中产生对 egfr-tkis 的抗性。一盒奥希替尼多少钱？奥希替尼目前在康安图有售，仿制药与原研药成分相同，效果非常好。详情请扫码咨询：