奥希替尼联合贝伐珠单抗治疗伴突变肺腺癌的疗效与机制

IIN,I,,H11 班级编号：B2 整形：2 班级：坌五中慧池单元代码 032系学科硕士论文（临床医学专业学位） 中文题目：奥希替尼联合疗效与机制贝伐单抗治疗EGFR突变肺腺癌 岳万方资料 中国医科大学 硕士论文 中国医科大学 硕士论文 奥希替尼联合贝伐单抗治疗EGFR突变肺腺癌的疗效及作用机制及EGFR突变肺腺癌 中国医药大学（辽宁）2017年2月，万方数据民警嘲讽蝎子，鄙视蝎子。蓉瓣倾慕；罐子里装满了莲藕；兴奋的甘露汤和被褥舞；二手鼹鼠扇。

关于毒毒，高高的花瓣，木鬃，姜曲，毒正的围巾，清淡的秘密进入承诺。浸箍攻击：燕零紫相辫甘燕锦锦甘菊菊露姬兰j曲咳攀链蝎。清孝干庚宇的记账人庚春库潘立三负责磷论文的酶促跛行。姬路翠与E-，j护航，揭秘与愚昧，镧，蜗牛，暴君：蘑菇辩论大学的Peri 将对本论文或辩论情况进行整顿。检索，作案者用于收集和复制、缩小或绘制等。保密 万方数据 中国医科大学 硕士论文 摘要 背景与目的：约2/3的新诊断非小细胞肺癌（）患者失去了手术机会。对于携带EGFR激活突变的晚期，可以使用EGFR。 TKI（如厄洛替尼或吉非替尼）治疗有效率超过70%。然而，最初有效的患者将不可避免地产生耐药性，最常见的是由于 EGFR 的二次突变。最近的研究表明，第三代EGFR。 TKI 奥希替尼可显着提高继发性突变肺癌患者的中位 PFS，而第一代 EGFR。 TKIs联合抗VEGF单克隆抗体（贝伐单抗）治疗EGFR敏感突变肺癌患者的PFS较单独使用EGFR-TKIs显着延长。

关于第三代EGFR。 TKIs联合抗血管生成治疗的作用和机制国内外尚未见报道。为此，本研究通过临床前移植肿瘤动物实验对此进行了探讨，为进一步的临床试验提供理论依据。研究方法：以携带EGFR突变的肺腺癌细胞株接种SPF雌性BALB/C裸鼠，构建肺癌异种移植物动物模型。干预因素为奥希替尼（第三代EGFR-TKI）和贝伐单抗（抗VEGF单克隆抗体靶向药物）或两者的组合。实验分组：奥希替尼低剂量组（n_5, 2.5 mg/kg/d），奥希替尼高剂量组（n_5, 5 mg/kg/d），奥希替尼低剂量联合贝伐单抗抗体组（n-5, 2.5 mg/kg/d，贝伐单抗 5 mg/kg，每周两次），奥希替尼高剂量联合贝伐单抗组（n=5。奥希替尼 5mg/kg/d，贝伐单抗 5mg/kg，每周两次）。给药：奥希替尼每天灌胃给药，贝伐单抗每周两次腹腔注射。接种后绘制肿瘤生长曲线，给药过程中，给药后两周处死裸鼠，对整个肿瘤进行活检。免疫组化SP法检测肿瘤HIF。图 1a，VEGF 和微血管密度 (MVD)。印迹法检测EGFR及其下游AKT和ERK信号通路蛋白的表达。结果： 1.肿瘤生长曲线：给药2周后，奥希替尼联合贝伐单抗治疗的两组肿瘤体积明显小于小剂量奥希替尼单药组（P/0.05)@ >, 低剂量奥希替尼联合组和高剂量奥希替尼单药组肿瘤体积无显着差异（尸体：O.178)。

大剂量奥希替尼联合组与大剂量奥希替尼单药组体积差异无统计学意义（P=0.642)。2.免疫组化结果：奥希替尼联合单药组比较-药物组，给药组的VEGF、表达率和MVD显着降低（P<0.05)@>，而大剂量奥希替尼单剂量组的VEGF表达率和MVD更低） -剂量奥希替尼组显着降低，西替尼单药组显着降低（P值分别为0.012、0.008和0.02，VEGF、VEGF、VEGF、VEGF、VEGF、VEGF、VEGF、VEGF ，奥希替尼高剂量或低剂量联合贝伐单抗组间VEGF和VEGF表达水平显着降低（P值分别为0.012、0.008和0.02），率和MVD差异无统计学意义（值分别为0.348、0.83和0.45方面活泼地。万方数据中国医科大学硕士论文3. Blot结果：奥希替尼单药组，P.EGFR、P.AKT、P.ERK的表达随着剂量的增加逐渐降低（P≮O.05)@> ; p-EGFR、p-EGFR、p-EGFR、p-EGFR、p-EGFR、p-EGFR和P.-AKT和p-ERK的表达明显低于奥希替尼单药组（0.0 5)@>；与大剂量奥希替尼单药组和小剂量奥希替尼联合组相比，p-EGFR、p-AKT和P.ERK的表达差异无统计学意义（P= -0.089、0.381和O.59)；P.EGFR、P.AKT和P.ERK蛋白表达无显着差异（P=0.216、0.178和0.07，分别为6)@ >.

各治疗组EGFR、AKT、ERK表达无差异（P>0.05)@>。结论：1.奥希替尼对突变肺腺癌异种移植物有较强的抑制作用。贝伐单抗与贝伐单抗联合应用奥希替尼可显着提高奥希替尼的抑瘤能力，二者具有协同作用。2.贝伐单抗可降低肿瘤中VEGF的含量，降低微血管密度，改善肿瘤微环境，增强肿瘤的杀伤作用。奥希替尼. 贝伐单抗增强奥希替尼降低EGFR、ERK和AKT磷酸化的作用，协同抑制EGFR下游信号通路的激活，从而影响肿瘤生长。酪氨酸激酶抑制剂；抗血管生成治疗；肿瘤微环境IV万方数据中国医科大学硕士论文和：2/3的-细胞肺()已获至。谢米EGFR、EGFR-TKI(或)的发生率高达70%。，EGFR的Will.e与对EGFR TKI的影响最大。具有抗VEGF(对EGFR)的--TKI能在肺中的PFS。 -TKI) PFS in. at, the and -- EGFR TKIs with anti.. has not., this l do this, to a for.和：H 1 975肺细胞系（EGFR）进入小鼠BALB/供肺。是，清除 th (2.5 或 5 mg/kg/day,) 或 plus (5 mg/kg/, i.p.) 当 0.4.0.6 cm'.2 时，小鼠是 和 和。已完成：HIF·la、VEGF 和 MVD 由 on 完成。用于EGFR、AKT和ERK。：（1)的with in：两个，高低剂量，显示低（P<0.05)@>。低剂量加万方数据中国）医科大学硕士论文和hi.gll剂量，未显示e(e=-0.1 78)。高剂量加，不比剂量(P=0.642).(2)@ > : VEGF、 和 MVD plus, th 消失 (P<0.05)@>, VEGF, 和 MVD 在高剂量而不是低剂量 (ren O.012, 0.008 和 0.026), 在 VEGF, HIF la 和MVD 嗨。

Qu 和低剂量 (P_O.453).(3): In , of a dose—ofp-EGFR, p-AKT 和 p-ERK (P；p-EGFR、p-AKT和p-ERK高低剂量均无plus (p>0.05)@>, p-EGFR, p-AKT 和 p-ERK 在 plus 中没有 (g0.05)@>.both in 和 non-, the EGFR, AKT,无 (P>0.05)@>.: (1) 有 EGFR- , ^, itll 细胞 , 有 EGFR- 肺细胞 .(2) 由 VEGF 和 , . 可以by EGFR, ERK and AKT , it EGFR and ． Key : non-cell lung ; ; ;anti- ; - --like 4, 与间变性淋巴瘤激酶受体 酪氨酸激酶 酪氨酸激酶抑制剂 无进展生存 E20 Exon B exon 20 蛋白激酶-细胞外信号调节激酶、ATP、三磷酸腺苷、微血管密度、肝细胞生长因子、TGF.0[-0、转化生长因子-.1.-lIX、缺氧诱导因子、FGF、成纤维细胞生长因子，PDGF，血小板衍生生长因子，VII，万发ng 数据，中国医科大学硕士论文目录摘要…………………………………………………………………………………………………………………………………………………… ..................................................... ..................................................... ……………………………………………………………………………… ..................................................... .... V 英文缩写……………………………………………………………… VII 奥希替尼联合贝伐单抗的疗效及作用机制EGFR突变肺腺癌的治疗………… 11 前言…………………………………………………………………… 方法………​​… ..................................................... ................................ 22.1 主要试剂和仪器.......................... …………………………………………………………………… ……………… 22.1.1 实验动物………………………… 22.1.3 主要试剂………………………… 22.1.3 主要试剂………………………… 32.1.4 试剂制备………………………… 42.2 实验方法和程序… ． 52.2.1 细胞恢复步骤………………………… 52.2.2 细胞传代步骤………………………………52.2-3 细胞计数………………………………………………62.2 .4 药物制备………………………… 62.2.5 移植肿瘤的建立和分组裸鼠模型………………………………72.2.6 West……