FDA批准贝伐单抗治疗性抗体的试剂盒抗体试剂盒

贝伐珠单抗试剂盒及抗药抗体试剂盒的制作方法

【技术领域】

[0001] 本发明涉及磁粉化学发光免疫诊断领域，具体涉及一种贝伐单抗试剂盒和抗药抗体试剂盒。

【背景技术】

[0002] 近年来，国内外对治疗性抗体的研究越来越深入，广泛应用于炎症性疾病、免疫性疾病、感染性疾病和癌症的治疗，进展迅速，包括发病机制、临床诊断和临床治疗。预后、遗传，并逐渐发展到对相关药物给药过程中产生的抗体的研究，即抗药抗体（ADA）。

[0003] 血管内皮生长因子(VEGF)在肿瘤的发生发展中起重要作用。VEGF通过血管内皮细胞表面的受体激活下游信号，可以诱导内皮细胞的生长、迁移和管状形成，促进新血管的形成，提高血管通透性，满足肿瘤细胞对氧和营养。贝伐单抗（商品名）是FDA批准的重组人源化单克隆IgG1抗体。它具有两条重链和两条轻链的分子量，可以与所有亚型的VEGF-A结合。可阻断VEGF与受体相互作用介导的信号通路，阻断肿瘤血管生成。经临床验证，可有效延长癌症患者的生存期，对临床肿瘤的治疗具有重要意义。目前主要用于各种转移性癌症的治疗，如转移性结直肠癌和晚期非小细胞肺癌联合5-FU为基础的化疗的一线治疗。

[0004] 然而，在贝伐单抗治疗过程中，会产生针对自身的ADA，使血浆中贝伐单抗的浓度水平降低，进而疾病症状再次出现甚至恶化。因此，非常有必要评估体内VEGF治疗性抗体及其对应的ADA水平，对患者进行直接监测，协助医务人员准确诊断病情。目前已有报道ADA的检测方法，主要是酶联免疫吸附法，但该方法存在不足。

[0005] ADA的检测简便易行，特异性高，可为肿瘤单抗药物的临床应用提供更加客观的实验依据。然而，与其他生物检测或免疫检测相比，这种检测方法、技术、工具或产品仍存在诸多不足，限制了其应用。这些缺点主要包括以下几个方面：（1)检测试剂检测过程是一种开放的方法，容易造成各种试剂之间的交叉污染，影响检测结果；（2)该方法多采用辣根过氧化物酶进行检测，其检测范围和灵敏度较低。

[0006](3)方法的检测时间通常响应较长，完成一次检测所需的总时间一般在2小时以上，不能完全满足临床快速诊断的需要。

[0007]（4)方法不能随机注入检测，检测结果有滞后现象。

[发明概要]

[0008] 本发明所要解决的主要技术问题是提供一种采用新型化学发光法测定的贝伐单抗试剂盒及其抗药抗体试剂盒。

[0009] 为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是提供一种贝伐单抗试剂盒，包括生物素化抗抗体、校准品、质控品、AP-抗人IgGl抗体、磁性微粒试剂、化学发光底物和清洗液，生物素化的抗抗体是与生物素偶联的抗抗体，AP-抗人IgG1抗体是AP标记的抗人IgG1抗体，磁粉​​试剂是纳米磁性的表面带有抗生物素蛋白的颗粒悬浮液。

[00-0]在本发明的一个优选实施例中，生物素化的抗抗体是通过生物素与抗抗体分子表面的-NH2基团反应得到的。

[0011] 在本发明的一个优选实施例中，磁性粒子试剂中磁性粒子的直径为0.1-0.5μm，且磁性粒子试剂具有超顺磁性。

[0012] 在本发明的一个优选实施例中，校准品通过含有人血清制备校准曲线，质控品通过含有人血清制备。

[0013] 在本发明的一个优选实施方案中，化学发光底物包括3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧基)-苯基-1，2-二氧杂环丁烷二钠盐AMPH)。

[0014] 提供一种抗抗药抗体试剂盒，包括生物素化、抗抗体校准品、抗抗体质控、AP-抗ADA抗体、磁粉试剂和清洗液，生物素化是与生物素结合的一对，AP-anti-ADA抗体是AP标记的抗ADA抗体，磁粉​​试剂是表面有亲和素的纳米磁粉悬浮液。

[0015] 在本发明的一个优选实施方案中，生物素化是通过生物素与表面上的-NH 2 基团反应而获得的。

[0016] 在本发明的一个优选实施例中，磁性颗粒试剂中磁性颗粒的直径为0.1-0.5μm，并且该磁性颗粒试剂具有超顺磁性。

[0017] 在本发明的一个优选实施例中，抗抗体校准品由抗抗体制备以获得校准曲线，抗抗体质控品由抗抗体制备。

[0018] 在本发明的一个优选实施方案中，化学发光底物包括3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧基)-苯基-1，2-二氧杂环丁烷二钠盐AMPH)。

[0019] 本发明的有益效果是:本发明的贝伐单抗试剂盒和抗药抗体试剂盒采用全自动磁粉化学发光检测方法，选用碱性磷酸酶AP-金刚烷AMPH)体系，具有稳定性好、灵敏度高、重复性好等优点。同时大大缩短了检测时间。完成一次检测总时间不到50分钟，操作简单方便，检测真正实现全自动化。

【图纸说明】

[0020] 为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所使用的附图进行简单介绍。显然，以下描述中的附图只是本发明的一部分。具体实施方式对于本领域普通技术人员来说，在没有创造性劳动前提下，可以根据这些附图获得其他附图，其中： 图1为本发明试剂盒的检测原理图；图2为本发明Anti-kit的检测原理图；图3是本发明试剂盒与国外知名公司同类产品样品的对比图。无花果。图4为本发明试剂盒实际检测浓度与理论浓度的线性回归图；图5为本发明Anti-kit的实际检测浓度与理论浓度的回归线性图。【详细方式】

[0021] 下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整的描述。显然，所描述的实施例只是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

[0022] 实施例1:提供贝伐珠单抗1^￥3(^2111]^13试剂盒，包括生物素化抗136￥3(^2111]^13抗体、校准品、质控品、AP-抗人IgG1抗体、磁粉试剂、化学发光底物和清洗液。生物素化的抗抗体是与生物素偶联的抗抗体。AP-抗人IgG1抗体是AP标记的抗人IgG1抗体是碱性磷酸酶AP的组合和抗人IgG抗体，磁粉​​试剂为纳米磁粉悬浮液，表面有抗生物素蛋白SA基团，清洗液可以是清洗浓缩液，使用时准备好。

[0023]生物素化的抗抗体是通过生物素与抗抗体分子表面的-NH2基团反应得到的。磁性粒子试剂中磁性粒子的直径为0.5μm，磁性粒子试剂具有超顺磁性。校准品由所含人血清制备以获得校准曲线，质控品由所含人血清制备。化学发光底物包括3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧基)-苯基-1,2-二氧杂环丁烷二钠盐，主要成分是金刚烷(AMPH)，在其催化下释放光子碱性磷酸酶。

[0024] 该检测试剂盒基于磁粉化学发光检测原理实现抗药抗体的免疫学含量检测，检测原理如图1所示:单克隆抗体药物样品和磁粉试剂M，生物素化抗抗体R1混合得到样品-M-R1复合物，洗涤后加入AP-抗人IgG1抗体R2得到样品-M-R1-R2复合物，洗涤后加入化学发光底物，测定发光结果。

[0025] 实施例2：提供一种抗抗药抗体检测试剂盒，包括生物素化、抗抗体校准物、抗抗体质控、AP-抗ADA抗体、磁粉试剂和清洗液。生物素化与生物素偶联。AP-anti-ADA抗体是AP标记的抗ADA抗体，将碱性磷酸酶AP与抗ADA（抗-）抗体偶联。磁粉试剂是一种表面带有抗生物素蛋白SA基团的纳米磁粉悬浮液。清洗液可以是使用时配制的清洗浓缩液。其中ADA是指抗药抗体Anti-，这里特指Anti-。

[0026] 通过生物素与表面上的-NH 2 基团反应获得生物素化。磁性颗粒试剂中磁性颗粒的直径为0.1-0.5μm，