TAF适合恩替卡韦耐药患者吗(TAF稀释对上皮细胞的影响)

TAF(伟力得)是乙肝药物TDF(替诺福韦酯)的第二代产品，不仅可以克服TDF可能造成肾脏和骨密度损害的副作用，还可以降低骨质疏松的风险。适用人群：1)新治疗患者；2)联合治疗的患者；3)每天服用恩替卡韦2片的患者；4)对核苷类似物单一耐药或反应差的患者；5)既往有拉米夫定耐药和阿德福韦酯或TDF引起肾损害的患者。

Veride的性价比很高，相当于替诺福韦的疗效，低于替诺福韦的副作用。也是0耐药，对乙肝患者很友好，隔着屏幕都让心跳。这是一种适用于大多数乙肝患者的新药，但国内仍有很多乙肝患者正在使用的药物，如恩替卡韦。恩替卡韦是临床广泛使用的抗病毒药物，疗效优于拉米夫定。然而，恩替卡韦也更贵，大多数制造商比拉米夫定和阿德福韦酯更贵。有一定的经济负担。

治愈乙肝的药出来了吗？直接针对cccDNA的药物，如使用CRISPR/Cas9的药物，距离我们还有三到五年的时间。一旦这种药物成功，CCC cDNA就可以完全消除。间接靶向cccDNA的药物现在已经存在。事实上，目前上市的药物和所有其他进入临床试验的不同药物对cccDNA水平都有一定的影响。但是这些药物通过间接抑制CCC cDNA的表达来降低病毒，这些药物不能清除CCC cDNA。

TAF稀释对上皮细胞的影响

如前所述分离间质成纤维细胞。简而言之，除去上皮层后，收集含有基质成纤维细胞和免疫细胞的循环液，以500g离心10分钟，再悬浮，并测量细胞数量和生存力。新鲜的基质成纤维细胞和免疫细胞在T75细胞培养瓶的完整培养基中孵育(美国宾夕法尼亚州匹兹堡费希尔科学公司。).每48小时更换一次培养基，以去除非粘附细胞。细胞融合后，用胰蛋白酶处理，并在处理前以1105细胞/孔的浓度接种到24孔培养板中至少48小时。从艾滋病研究和参考中获得粉末状TFV。试剂计划(国立卫生研究院艾滋病部，国立卫生研究院试剂计划。TFV原溶液浓度为56毫克/毫升。方法是在5mgTFV粉末中加入16mlPBS，然后在剥离的培养基中稀释至合适的工作浓度。

TAF由Gilead Science公司(加利福尼亚州福斯特市)提供，溶于PBS中，浓度为10mM，无菌过滤，通过吸光度检查浓度，在260nm处的消光系数为11690。随后，将TFV和TAF在完全培养基中稀释至合适的工作浓度。将TFV或TAF分别加入到顶极(腔)和侧基底室的极化上皮细胞中24小时。对于一些实验，如结果所示，TFV和TAF只被添加到根尖。处理后，将细胞洗涤、收获并溶解在300l 70%甲醇中，并在如上所述的TFV聚合酶链反应评估前立即储存在-80。通过串联质谱液相色谱法测量细胞内TFV-DP浓度，并且基于每个样品中的细胞数量将归一化值转换成fmol/百万细胞32。而侧室的基腔为24小时，或者只有根尖。本研究和我们之前的研究中使用的TFV-DP的测量时间是基于最初的临床试验，该试验在阴道中使用了局部TFV，并报告了从性交前24小时到性交后24小时对女性艾滋病毒感染采取的有效保护措施。培养后，细胞在培养基中洗涤三次以除去细胞外的TFV或TAF，然后上皮细胞插入物被转移到新的孔中，新鲜的培养基被添加到顶端和基底侧室中。24小时后，从细胞插入物的顶部和基底的外室回收条件培养基。

类似地，将TFV或TAF加入在24孔板中生长24小时的汇合基质成纤维细胞中，然后重复洗涤，然后加入新鲜培养基以在24小时收集CM。对于上皮细胞时间历程实验，每隔24小时更换一次每个隔室中的培养基，并在每个时间点收集CM。为了评价上皮细胞和成纤维细胞之间的相互作用，将极化的上皮细胞插入物转移到含有成对成纤维细胞融合培养物的24孔板中。将TFV或TAF加入到极化上皮细胞的顶部24小时，然后收集基底外的CM。在该培养结束时，细胞插入物和培养室/-成纤维细胞在基底的顶部和外部被彻底清洗，使得上皮细胞和成纤维细胞都不包含任何细胞外TFV或TAF。然后，将细胞分成两组，由转移到新孔的EC插入物(无成纤维细胞)和仅在下腔室的成纤维细胞组成。在每种组合中，加入缺乏ARV的新鲜培养基，将细胞再培养24小时，然后回收条件培养基并分析其抗艾滋病毒活性。

为了评价MRP在ARV运动中的作用，将上皮细胞与TFV或TAF孵育20分钟，然后加入人MRP特异性抑制剂MK571(适马-奥尔德里奇，圣路易斯，密苏里州)4小时。MK571被添加到250ul l完全培养基的顶部和基底侧室，并在细胞冲洗和孵育后存在于新鲜培养基中。24小时后，从细胞插入物的顶端和基底侧室收集CM。CM以10，000g离心，并保持在-80直到检测到艾滋病毒感染。未处理的对照细胞与供体匹配，同时平行处理。如上所述，用cell titility 96水溶液细胞增殖试验(美国威斯康星州麦迪逊市Promega)和台盼蓝染色(犹他州洛根市HyClone Laboratories，Inc .)处理后，检测细胞活力。所有样品均采用盲法检测，没有提供细胞来源和处理的信息。那么taf在哪里可以买到呢？价格是多少？如果需要购买，可以在下方添加微信。