TAF治疗后各自基线序列的比较结果

第96周监测耐药性。在任何病毒血症患者的第96周(HBV DNA69 IU/ml)或早期停药后至少24周或更长时间，尝试通过HBV Pol/RT对血清样本进行测序由于分析的限制，HBV DNA水平为69 IU/ml的样本不包括在测序分析中。采用全自动麦格纳纯系统从200l患者血清中分离脱氧核糖核酸。扩展的高保真聚合酶链反应系统(罗氏)用于扩增HBV的pol/RT结构域(氨基酸1至344)。扩增的聚合酶链反应产物在使用Quant-iT PicoGreen dsDNA试剂盒(加州卡尔斯巴德Life Technologies)定量之前，先用Ampure XP珠子(加州布雷亚贝克曼库尔特公司)纯化。

对于HBV DNA159 IU/ml的患者，使用ABI BigDye Terminator v3.1循环测序试剂盒(马萨诸塞州沃尔瑟姆的Thermo Fisher Scientific)进行双脱氧测序。对于HBV DNA水平为159 IU/ml的患者，使用Illumina-MiSeq平台(150个碱基的双端读数；Illumina，Inc .圣地亚哥，加利福尼亚州)对聚合酶链反应产物进行深度测序。对患者基线样本进行深度或群体测序。使用MOSAIK(美国波士顿学院)，基线一致性序列用于比较相应基线后样本的原始读数。对于具有深度测序数据的样本，使用VICUNA对原始读数进行组装以创建组装序列，然后将其与组装序列进行比较。

氨基酸替换突变频率的截止值为15%，并将其与每个患者各自的基线序列进行比较。所有的扩增和测序步骤都是在DDL诊断实验室(荷兰雷斯维克)进行的。基线后将氨基酸混合物中的氨基酸完全调用到相应序列的分辨率不包括在基线中。多态性和保守氨基酸先前已经描述过。保守位点被定义为具有99%的一个氨基酸或两个氨基酸和一个氨基酸的观察位点。所有其他位置都被归类为多态。

在任何病毒学突破且无依从性证据的患者和保守性位点替代的患者中评估了对TAF或替诺福韦的体外敏感性。病毒学突破定义为HBV DNA最低点低于69 IU/ml或HBV DNA增加1.0-log10后，HBV DNA69 IU/ml的确认。如前所述进行表型分析，并做一些修改。简而言之，用于测序的HBV聚合酶链反应/逆转录聚合酶链反应产物被连接到表达缺失逆转录区的完整基因型A HBV基因组的质粒载体中。将重组质粒瞬时转染到HepG2细胞中，上清液中的HBV DNA用QuantiGene 2.0分支DNA技术和HBV特异性探针(Affymetrix，Santa Clara，CA)测定。

参照测量值计算EC 50。EC50的折叠变化是通过将参考样品的折叠变化与处理中样品的折叠变化进行比较来确定的。测量TAF组患者对TAF的敏感性。对于TDF组患者，由于血清酯酶的存在，TDF在细胞培养基中不稳定，因此评估了对替诺福韦的敏感性。野生型实验室病毒(pHY92)和ADV抗性病毒(rtA181V rtN236T)分别用作敏感性和抗性对照。

如前所述，通过使用液相色谱/质谱测量血浆中替诺福韦水平来测量对研究药物的粘附性。不粘连定义为替诺福韦水平低于定量限或替诺福韦谷水平低于平均水平10倍以上，TDF为每天一次300mg(1 ng/ml)。好像taf比TDF好，建议买。TAF哪里可以买到？价格是多少？详情请咨询下方微信。