替尼细胞肺癌患者的耐药性与临床

[摘要] 肺癌是目前世界上最常见的恶性肿瘤之一。非小细胞肺癌 () 占肺癌的 75%-85%。对于晚期治疗，已经开始从传统的化疗药物治疗向分子靶向治疗转变。新的阶段。吉非替尼()是首个晚期治疗的靶向药物，具有特异性好、起效快、不良反应少等特点。尽管吉非替尼对患者显示出良好的治疗效果，但由于存在耐药性，该药的应用受到严重限制。它是信号转导激活蛋白家族（和 STAT）的成员。它在不同类型的细胞和组织中广泛表达。它介导多种细胞因子信号向细胞核的传递，并影响许多靶基因的转录。已有报道JSI-124、等抑制剂通过抑制活化，增强细胞对吉非替尼的敏感性，提高吉非替尼在细胞中的作用。但介导吉非替尼耐药的机制尚不十分清楚，需要进一步研究。本文选取了几种非小细胞肺癌细胞系，观察吉非替尼对EGFR及细胞内活性的影响，并采用印迹、RNA干扰、免疫沉淀等方法深入研究吉非替尼耐药机制。 . 增强细胞对吉非替尼的敏感性，提高吉非替尼在细胞中的作用。但介导吉非替尼耐药的机制尚不十分清楚，需要进一步研究。本文选取了几种非小细胞肺癌细胞系，观察吉非替尼对EGFR及细胞内活性的影响，并采用印迹、RNA干扰、免疫沉淀等方法深入研究吉非替尼耐药机制。 . 增强细胞对吉非替尼的敏感性，提高吉非替尼在细胞中的作用。但介导吉非替尼耐药的机制尚不十分清楚，需要进一步研究。本文选取了几种非小细胞肺癌细胞系，观察吉非替尼对EGFR及细胞内活性的影响，并采用印迹、RNA干扰、免疫沉淀等方法深入研究吉非替尼耐药机制。 .

第一部分继续激活对吉非替尼作用的抵抗。这部分实验主要在细胞水平上比较了几种非小细胞肺癌的活性，观察吉非替尼对几种非小细胞肺癌EGFR的影响。以及活动的影响。结果表明，EGFR突变细胞的活性明显强于EGFR野生型A549细胞。虽然吉非替尼可以显着抑制A549细胞中EGFR的磷酸化，但在相同浓度和时间下，吉非替尼对这三种细胞中酪氨酸705的磷酸化没有显着抑制。影响。提示异常激活可能影响吉非替尼的作用。同时，抑制剂与吉非替尼联合使用可显着增强吉非替尼抑制细胞增殖的作用。进一步证明持续激活会影响吉非替尼在细胞中的作用。第二部分吉非替尼耐药持续激活机制1、EGFR突变对吉非替尼耐药的影响。本文成功稳定转染表达EGFR外显子20插入突变的细胞系。随后，印迹试验发现稳定转染细胞中过表达的EGFR促进了p705-的磷酸化，发现吉非替尼可以抑制这种激活。第二部分吉非替尼耐药持续激活机制1、EGFR突变对吉非替尼耐药的影响。本文成功稳定转染表达EGFR外显子20插入突变的细胞系。随后，印迹试验发现稳定转染细胞中过表达的EGFR促进了p705-的磷酸化，发现吉非替尼可以抑制这种激活。第二部分吉非替尼耐药持续激活机制1、EGFR突变对吉非替尼耐药的影响。本文成功稳定转染表达EGFR外显子20插入突变的细胞系。随后，印迹试验发现稳定转染细胞中过表达的EGFR促进了p705-的磷酸化，发现吉非替尼可以抑制这种激活。

说明持续激活对吉非替尼作用的耐药性具有细胞选择性。进一步利用RNA干扰EGFR研究EGFR对细胞活性的影响。发现当EGFR转染细胞时，EGFR表达降低，相应的705磷酸化水平显着下调，说明吉非替尼耐药性的持续激活与细胞内EGFR自身分子的表达有关。2、/JAK信号通路对持续激活的影响/JAK信号通路是主要的激活通路。这部分实验比较了JAK1和JAK2在A549、细胞中的活性，发现JAK1在这两种细胞中的活性没有JAK2和JAK2的显着差异，但发现细胞中JAK1/JAK2异二聚体的形成明显多于A549细胞，这可能是中高活化的一个因素。进一步检测JAK1和JAK2上游受体对活性的影响，发现在细胞中使用RNA干扰敲除相应阻断了(Y705）的磷酸化，表明抗吉非替尼作用与在细胞内的表达有关，是细胞因子的膜受体，介导/JAK/信号通路，促进活化。

因此，首先使用细胞因子芯片检测细胞中某些细胞因子的表达水平，发现只有IL-6与细胞分泌上清最接近。为了发现其他可能影响活化的细胞因子，用放线菌酮作用于细胞，发现条件培养基不能阻断细胞内的活化。但FBS（含IL-6），加入重组表达IL-6后，发现它们并不影响细胞内的活化。以上实验表明，细胞内的活化不影响细胞内活化）不依赖于细胞本身分泌的细胞因子。以上研究表明，活化与细胞内的EGFR和分子有关，与其分泌的细胞因子IL-6无关，表明细胞本身的异常激活。考虑到该细胞为EGFR突变细胞，EGFR/HER2异二聚体的形成率远高于A549，且EGFR/HER2异二聚体可被HER2激活。为了探究EGFR与HER2之间的关系，我们利用RNA干扰来研究其对细胞内EGFR/HER2异源二聚化的影响以及EGFR形成的影响。研究表明，敲除后EGFR与HER2的结合显着降低，提示其参与了EGFR/HER2异源二聚化的形成。我们使用RNA干扰来研究其对细胞内EGFR/HER2异二聚化的影响 EGFR形成的影响。研究表明，敲除后EGFR与HER2的结合显着降低，提示其参与了EGFR/HER2异源二聚化的形成。我们使用RNA干扰来研究其对细胞内EGFR/HER2异二聚化的影响 EGFR形成的影响。研究表明，敲除后EGFR与HER2的结合显着降低，提示其参与了EGFR/HER2异源二聚化的形成。

进一步说明持续激活与/EGFR/HER2复合物分子的形成有关。3、吉非替尼对细胞内socs-3的影响 细胞内活化也与细胞的多种内源性负调控有关。因此，该方法用于进一步研究影响/JAK/通路的内源性负调控分子socs-3。结果表明，吉非替尼能够以时间依赖性方式抑制细胞内socs-3的表达，从而解除细胞内重要的内源性负调控，维持细胞内的持续活化。这种作用与吉非替尼抑制 ERK1/2 激活密切相关。本文的研究表明，细胞/EGFR/HER2复合物的形成促进了EGFR/HER2通路与/JAK通路之间的对话，导致JAK1/JAK2二聚化增加，最终导致组成型激活，而作用吉非替尼被抑制细胞内socs-3的表达影响该途径的内源性负调控，从而维持细胞内的持续活化。综上所述，由于不依赖于EGFR激活的激活的存在，在细胞中形成了对吉非替尼的原发性耐药；同时，吉非替尼抑制socs-3的表达，降低内源性靶点的性别负调控，对吉非替尼的作用形成继发性耐药；双方共同推动持续激活，从而介导其对吉非替尼的耐药性。本论文的研究结果阐明了持续激活参与吉非替尼耐药的机制，表明抑制/EGFR/HER2复合物的形成是减少激活的重要途径，是未来发展的重要途径。拮抗吉非替尼以提高风险的药物。的作用提供了一个新的潜在靶点，对于新药的研发具有重要的理论意义和应用价值。这是未来开发拮抗吉非替尼的药物以提高风险的重要途径。的作用提供了一个新的潜在靶点，对于新药的研发具有重要的理论意义和应用价值。这是未来开发拮抗吉非替尼的药物以提高风险的重要途径。的作用提供了一个新的潜在靶点，对于新药的研发具有重要的理论意义和应用价值。