TAF是否直接影响ISRE依赖转录？

为了检查TAF是否直接影响ISRE依赖的转录，我们使用pISRE-TA-Luc检测报告基因，该基因编码ISRE控制下的荧光素酶(Luc)基因，该基因负责I型IFN刺激。对照TAF-1 KD细胞和TAF-1 KD细胞之间的荧光素酶活性没有显著变化，表明TAF-1在由ISGF3复合物调节的ISRE依赖性转录中没有直接作用。这似乎与显示的结果相反。TAF-1 KD细胞ISGmRNA水平升高。

由于核小体结构、组蛋白H1和染色质的结合以及末端元件对染色质的影响，来自瞬时转染基因和稳定整合基因的转录表达模式是不同的。因为TAF-1具有组蛋白伴侣活性，并且是INHAT复合物的主要成分，我们假设TAF可能通过染色质结构调节来控制ISG转录。TAF-1和共有的C端酸性结构域对它们的组蛋白伴侣活性和INHAT活性非常重要。我们构建了TAF-IC缺失酸结构域突变体的表达载体，并进行了拯救实验，以检验蛋白伴侣活性和/或INHAT活性是否是TAF-1影响ISG转录所必需的。

在转染TAF-I siRNA表达载体的细胞中，观察到TAF-Is被siRNA靶序列修饰的Flag标记的表达，通过野生型TAF-I而不是TAF-I C抑制TAF-I KD增强的ISG转录，TAF-I的酸性结构域在ISG的调控中起着至关重要的作用。为了检查TAF是否影响内源性ISG启动子上转录复合物的形成，我们进行了ChIP分析以测量TAF-1 KD中有或没有IFN的STAT1、STAT2和Pol II的量。与对照组相比，在IFN刺激后的早期时间点，TAFKD细胞中结合ISG启动子的STAT1、STAT2和Pol水平升高。这些发现表明，TAF-1影响ISG启动子上转录复合物的形成，我们预测上述影响是由TAF-1介导的染色质变化引起的。因此，我们使用针对组蛋白H3(H3)和乙酰化组蛋白H3(H3K9/14Ac)的抗体进行ChIP分析。已知后者与主动转录的基因有关，其乙酰化水平由与HATs相关的启动子调节，如p300/CBP和GCN5。

QRT-聚合酶链反应分析显示，TAF-1 KD细胞和对照细胞在ISG启动子上的组蛋白H3的量在有或没有干扰素处理的情况下没有显著差异。在没有干扰素的情况下，TAFKD细胞中的乙基化组蛋白H3与对照细胞中的保持不变，但是在干扰素的刺激下，TAFKD细胞中的乙酰化组蛋白H3在早期增加。由于STAT和HAT之间的相互作用，它们以干扰素依赖的方式被招募到ISG启动子。

因此，TAFKD细胞乙酰化组蛋白H3的增加可能是由于ISG15启动子STAT的增加。此外，使用针对接头组蛋白H1.2(H1) (H1亚型是HeLa细胞中高表达的组蛋白H1亚型，在体内与TAF-1相关)的抗体进行的ChIP分析证明，在没有IFN的情况下以及在IFN刺激的早期时间点，TAF-1 KD细胞的ISG启动子上的组蛋白H1显著降低。这些结果表明，TAF在ISG启动子上调节组蛋白H1，但在ISG转录中不作为组蛋白H3-H4或INHAT的分子伴侣。接下来，我们解决了组蛋白H1是否调节ISG转录的问题。我们用组蛋白H1 siRNA的表达载体制备了组蛋白H1 KD细胞。使用该载体，观察到组蛋白H1 KD细胞中组蛋白H1蛋白的残留水平约为对照细胞的25%。为了研究ISGs转录诱导的影响，我们测量了组蛋白H1 KD细胞中ISG mRNA的水平。taf现在哪里可以买到？价格是多少？如有必要，在下方添加微信二维码。