TAF调节ISG起始中组蛋白H1的量

与对照组细胞相比，组蛋白H1KD细胞中的ISGmRNA水平较高，与TAFKD细胞中的一样。我们还观察到，其在用靶向组蛋白H1.2的siRNA转染的组蛋白H1 KD细胞中具有相同的效果，并且靶向组蛋白H1.2的区域不同于图中用于分析的siRNA表达载体的区域。这些结果表明，组蛋白H1作为ISG转录的负调节因子，与TAFKD细胞ISG启动子上组蛋白H1的减少有很好的相关性。

我们检测了TAF和组蛋白H1的双KD对ISG转录的影响。在TAF和组蛋白H1KD细胞中，ISGmRNA水平升高，但在双KD细胞中没有积累，这表明TAF和组蛋白H1可能以同样的方式在ISG转录过程中发挥作用。为了确定ISG启动子上组蛋白H1的水平是否影响TAF的染色质结合，我们测量了组蛋白H1KD细胞中ISG启动子上TAF的量。在转染组蛋白H1siRNA的细胞的ISG启动子上，组蛋白H1的量显著减少，而组蛋白H1KD和对照细胞中TAF的量没有变化。这些结果表明ISG启动子上的组蛋白H1不影响TAF的染色质结合。

根据上述结果，可以合理推断，TAF调控的组蛋白H1的量处于ISG起始，组蛋白H1在转录沉默状态和IFN刺激诱导的ISG转录早期负向控制，组蛋白H1在多个启动子区染色质结构的形成中起作用。为了检验TAF和组蛋白H1是否参与调节ISG启动子附近的染色质结构，我们进行了MNase保护试验来监测TAFKD和组蛋白H1KD细胞中的染色质紧密度。在所有情况下，总的DNA消化模式(核小体重复长度)似乎是相似的，这表明TAF-1和组蛋白H1.2的KD或IFN处理不会影响整个基因组的核小体结构。因此，在这种实验条件下，组蛋白H1.2的耗竭水平可能不足以引起以前报道的全基因组核小体重复长度的显著变化，组蛋白的定位可能由TAF进行。H1不是全基因组机制，而是在某些基因的染色质中。然后，我们使用覆盖ISG启动子区的引物进行qRT-PCR以确定该对的MNase消化。与干扰素刺激诱导的转录沉默和早期转录的对照细胞相比，TAF细胞和组蛋白H1KD细胞中MNase消化产生的残余基因组DNA的数量显著减少。

这些结果表明，TAF招募组蛋白H1到ISG启动子，因此在ISG启动子区域附近保持相对紧密的染色质结构，以防止转录机制的加载和/或Pol II的转录。在IAS转录的TAF研究中，我们研究了TAF和ISG启动子之间的关系。TAF与ISG启动子处于转录沉默状态有关，在IFN刺激下逐渐释放的TAF减少很可能导致ISG启动子区组蛋白H1以IFN依赖的方式减少。先前的研究表明，TAF倾向于与未乙酰化和低乙酰化的蛋白质相互作用，但不与高乙酰化的组蛋白相互作用。我们表明，在干扰素处理的细胞中，ISG启动子的乙酰化组蛋白水平增加。基于这些结果，我们假设由IFN处理诱导的乙酰化组蛋白将限制TAF与ISG启动子的结合。

为了验证这一假设，我们使用从用HDAC抑制剂TSA处理的HeLaS3细胞制备的染色质的ChIP分析来维持ISG启动子上的高水平组蛋白乙酰化。TSA处理的细胞中ISG15启动子上的组蛋白H1含量低于模拟处理的细胞。在这些条件下，我们还测量了与ISG启动子结合的TAF量。然后用与图66A相同的方法制备的细胞用TSA处理，TAF水平与ISG舞膜结合。taf现在哪里可以买到？价格是多少？如有必要，在下方添加微信二维码。