贝伐珠一种单抗和曲妥珠单抗药物浓度的方法，

技术特点：

1.一种同时检测贝伐单抗和曲妥珠单抗药物浓度的方法，其特征在于，以同位素标记的单克隆抗体为内标，先用磁性微球富集人血清样品中的贝伐单抗单克隆抗体和曲妥珠单抗单克隆抗体。然后将富集的单克隆抗体进行蛋白质变性、还原、烷基化和酶水解，最后通过液相色谱-串联质谱法对人血清进行准确定量。贝伐单抗和曲妥珠单抗的含量；质谱参数如下： silu

Tm值

单克隆抗体是重组的、稳定的同位素标记的人单克隆抗体。2.根据权利要求1所述的同时检测贝伐单抗和曲妥珠单抗药物浓度的方法，其特征在于，包括以下详细步骤：步骤s1、制备校准系列浓度样品溶液、质控溶液和内标工作溶液；步骤s2、取空白血清、一系列浓度的校准液、质控液和待测样品，分别加入琼脂糖基质磁微珠和内标。工作液和磷酸盐缓冲盐溶液在室温下摇匀，孵育 25-。孵育完成后，静置分离，去除上清；在步骤 s3 中，在磁珠中加入磷酸盐缓冲液，轻轻散开磁珠，将磁珠放在磁珠上。在磁力分离器上静置分离除去上清液，重复此步骤2-3次；步骤s4，向步骤s3收集的磁珠中加入碳酸氢铵溶液，95℃反应5min，短暂离心30s，弃上清；步骤s5，恢复至室温后，将二硫苏糖醇溶液加入步骤s4的磁珠中，100℃反应，短暂离心30s，弃上清；步骤s6，在步骤s5的磁珠中加入碘乙酰胺溶液，室温避光反应30.0min；步骤s7，在步骤s6的混合物中加入胰蛋白酶，1200.0rpm摇动，37°C酶解2.5h，然后加入甲酸水溶液终止酶解反应；步骤s8中，取步骤s7中的混合物，在 的条件下离心5 min。3.根据权利要求2所述的同时检测贝伐单抗和曲妥珠单抗药物浓度的方法，其特征在于，所述步骤s1中制备的系列浓度的校准液为使用空白制备的曲妥珠单抗和贝伐单抗系列标准溶液。人血清，包括：2、5、25、75、125、250、500μg/ml。4.根据权利要求2所述的同时检测贝伐单抗和曲妥珠单抗药物浓度的方法，其特征在于，所述步骤s1中，质控溶液采用空白低液制备，

单克隆抗体和贝伐单抗质控液，低、中、高浓度包括：3、80、400μg/ml。5.根据权利要求2所述的同时检测贝伐单抗和曲妥珠单抗药物浓度的方法，其特征在于，步骤s1中内标工作溶液采用5.@0.1%甲酸水溶液制备。溶液配制内标工作液，内标工作液含有稳定同位素标记的通用单克隆抗体10μg/ml。6.根据权利要求1所述的同时检测贝伐单抗和曲妥珠单抗药物浓度的方法，其特征在于，液相色谱条件如下： 流动相：a 相：含0.1%甲酸的水溶液酸; b阶段：含有0.1%甲酸的乙腈溶液；洗脱梯度：流动相a+流动相b=100%；0～0.@ >5min，流动相a的体积保持在90%；0.5～3.0min，流动相a体积从90%减少到60%；3.0～3.5min，流动相a体积从60%减少到5%；3.5～4.5min，流动相a的体积保持在5%；4.50～4.，流动相a的体积从5%增加到90；4.51～5.5min，流动相a体积保持在90%；流速为0.6ml/min；柱温：40℃。7.根据权利要求1所述的同时检测贝伐单抗和曲妥珠单抗药物浓度的方法，其中，质谱仪的离子源参数如下，离子源：电喷雾正离子源；喷雾毛细管电压：；离子源温度：600℃；离子源雾化气体：；离子源加热辅助气体：；碰撞气体：；气幕气：。

技术总结

本发明提供了一种同时检测贝伐单抗和曲妥珠单抗药物浓度的方法，属于单克隆抗体检测技术领域。贝伐单抗单克隆抗体和曲妥珠单抗单克隆抗体在人血清样本中，然后将富集的单克隆抗体进行蛋白质变性、还原、烷基化和酶水解，最后使用液相色谱-串联质谱法准确定量贝伐单抗单克隆抗体的含量与人血清中的曲妥珠单抗单克隆抗体相比，本发明提供的检测方法可以克服现有的单克隆抗体药物浓度分析方法影响定量的可靠性和实用性的缺点。缺点。缺点。

技术研发人员：谢永明、张子豪、王芳

受保护技术用户：上海中科新生命生物科技有限公司

技术研发日：2021.09.14

技术发布日期：2022/1/6