非小细胞肺癌患者接受一代TKI尼治疗过程中产生耐药

安诺路与厦门弘爱医院孔祥全主任团队发现，非小细胞肺癌患者在第一代TKI厄洛替尼治疗过程中产生耐药性，通过高通量测序技术发现其可能的耐药性。位点为EGFR，并对其耐药机制进行了研究。这也是世界上第一份关于耐药位点的报道，为肿瘤的临床治疗提供了新的策略。研究成果已发表在(IF=10.34）的权威肿瘤学杂志。

研究背景

在欧美 (5-15%) 和东亚 (40-55%) 的非小细胞肺癌 () 患者中发现表皮生长因子受体 (EGFR) 酪氨酸激酶结构域的激活突变）。其中，最常见的突变包括EGFR外显子19缺失和外显子21点突变，约占临床EGFR突变的90%。目前已知的第一代和第二代 EGFR TKI 耐药的原因包括：40-55% EGFR 点突变，10-15% 扩增，10% 小细胞肺癌转移，10% EGFR 扩增伴随点突变，5% 另外对于MET扩增，1%的BRAF突变、1%的KRAS突变、2-3%的PI3K突变和1-2%的MET突变，大约10%的耐药机制尚不清楚。本文首次报道EGFR/厄洛替尼治疗患者出现耐药现象并揭示其潜在机制。研究结果为临床治疗策略提供了新思路。

案例简介

患者为 55 岁男性，有吸烟史。 2014年1月确诊为肺腺癌，右中叶癌行根治性切除。术后病理诊断为右中肺周围中高分化腺癌pⅢa，多为原位腺癌，侵犯肺胸膜下。组织 ARMS PCR 测序显示患者有 EGFR 突变（图 1A、1E）。术后给予培美曲塞联合顺铂化疗4个周期，并定期随访。

图一（图1）

2017年6月，患者头颅MRI显示为多发性脑转移瘤，评估进展中。患者接受伽玛刀治疗转移瘤病灶，50%等剂量线，外周剂量11Gy、13Gy，中心剂量22Gy、26Gy，治疗次数加倍，吉非替尼靶向治疗同时进行。 PET-CT检查显示手术区无明显肿瘤复发征象，右侧枕叶和左侧顶叶有低密度影，FDG代谢降低，均为肿瘤治疗后的变化。患者L3椎体骨转移，L4椎体下缘骨转移，L3、L4病变接受伽马刀治疗。

2017年9月患者脑部MRI复查联合胸部CT、腹部CT、ECT及脊柱MRI显示患者为多发性脑转移伴骨转移，疗效评价为进展（图1B）。 CT结果显示左肺新增多个小结节，同时患者停止吉非替尼治疗。胸腔积液送安诺路进行NGS测序，结果显示患者含有EGFR/双突变。从患者样本中检测到 EGFR 和变异等位基因频率 (VAF) 分别为 70.61% 和 70.66%（图 1A、1E）。并表明EGFR是一个热点突变，在人口数据库(1000,,ExAC)和TCGA数据库中均未记录EGFR。

放疗后，患者接受厄洛替尼qd靶向治疗三个月，疗效评价为进展。脑部 MRI 和肺部 CT 显示多发性脑转移进展伴右侧胸膜转移（图 1C），表明患者对第一代 EGFR-TKI 厄洛替尼耐药。替莫唑胺化疗联合颅脑放疗后，将胸腔积液送至安诺路进行NGS测序。结果显示，患者仍有EGFR/双突变，变异等位基因频率（VAF）分别为1.19%和1.。 @>37%（图 1A、1E）。

图2（图2）

研究团队使用软件尝试模拟 EGFR / 可能导致耐药性的因素。首先，分别对 EGFR 或/或与 ATP 或厄洛替尼的复合物进行建模。接下来，计算这些配合物的能量。与比厄洛替尼更好的 EGFR/ATP 结合相比（ΔΔG=3.87 能量单位）（图 2C），表明对天然底物 ATP 的敏感性额外增加。蛋白质结构模拟结果提示EGFR/双突变可能是厄洛替尼耐药的原因（图2）.

2018年6月，患者至今已接受奥希替尼治疗，疗效评价稳定。

总结

安诺路始终秉承“以科技创新提升生活品质”为使命，在肿瘤检测领域不断探索。在这种情况下，安诺路研究团队回顾了EGFR突变患者的多线化疗和靶向治疗的治疗史。通过应用高通量测序技术，发现患者使用的是第一代TKI。就洛替尼而言，可能会出现一个新的耐药位点EGFR，这在之前的公共数据库和文献中都没有报道过，不仅丰富了EGFR的耐药位点数据库，也为后期的药物研发提供了新的靶点点辅助临床治疗决策。多个时间点的动态检测结果提示患者存在肿瘤异质性，动态检测结果可为后期患者治疗策略的选择提供新思路。

在这个案例的研究和分析过程中，不仅体现了安诺路高要求、严格的质量控制、高精度的检测能力，也说明了安诺路通过发现新位点对肿瘤报告的解读。专业性。为了让每位患者从报告中获得更多信息，安诺路采用“自动解读+人工解读”的双重复合解读机制。人为复合一份报告，并根据患者的临床情况进行深入的数据库挖掘和分析，力求为患者出具更完整、更准确的报告。 .

“免疫疗法现已成为肿瘤治疗研究的新方向，而由于肿瘤的时空异质性，安诺路的研究从未停止在肿瘤的精准诊疗上。安普健—868实体瘤分子诊断，实现免疫治疗多维度检测（包括TMB水平、PD-L1表达、MSI检测、与免疫治疗疗效相关的基因突变检测），实时动态监测肿瘤克隆进化过程和药物耐药性，实现患者全程管理，全面解读FDA、EMA、CFDA、NCCN、CSCO指南推荐及临床试验等288种靶向药物，支持多样本灵活检测，满足临床及临床需求可能的。为满足患者的诊疗需求，我们致力于推动国内精准医疗产业的发展，这也是安诺德不可推卸的社会责任。”

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