肝癌晚期乙肝患者的临床资料分析及方法(图)

背景：肝细胞癌（HCC）是肝脏最常见的恶性肿瘤之一。大多数肝癌患者在初诊时已经处于疾病的中晚期。多靶点酪氨酸激酶抑制剂索拉非尼（，®）是治疗不能手术的晚期HCC的一线靶向药物。然而，由于肝癌的复杂生物学特性，索拉非尼的临床疗效存在高度异质性。因此，探索索拉非尼耐药机制对改善晚期肝癌患者预后具有重要意义。有氧糖酵解是肿瘤细胞糖代谢的主要方式，是糖酵解的关键酶，如丙酮酸激酶（M2、PKM2)和乳酸脱氢酶（, LDH)对肿瘤的发生和发展很重要。PKM2、LDHA等糖酵解关键酶与索拉非尼耐药的关系有待进一步研究。-(ERK)5通路，也称为BMK1通路，是-(MAPK)家族中新发现和新增的通路。近年来研究发现，ERK5的表达水平与各种恶性肿瘤的发生、发展有一定的关系。以往的研究表明，ERK1/2可以调节PKM2基因进入细胞核，影响细胞的恶性生物学行为。是-（MAPK）家族中新发现和增加的通路。近年来研究发现，ERK5的表达水平与各种恶性肿瘤的发生、发展有一定的关系。以往的研究表明，ERK1/2可以调节PKM2基因进入细胞核，影响细胞的恶性生物学行为。是-（MAPK）家族中新发现和增加的通路。近年来研究发现，ERK5的表达水平与各种恶性肿瘤的发生、发展有一定的关系。以往的研究表明，ERK1/2可以调节PKM2基因进入细胞核，影响细胞的恶性生物学行为。

作为索拉非尼的主要靶点之一，ERK1/2基因表达变化在索拉非尼耐药中发挥着重要作用。但同为MAPK家族成员的ERK5是否对PKM2有调节作用及其与索拉非尼耐药的关系仍需进一步研究。材料与方法： 1.回顾性分析119例接受索拉非尼治疗的晚期乙型肝炎相关肝癌患者的临床资料。根据治疗前血清乳酸脱氢酶水平将患者分为2组。分析血清乳酸脱氢酶水平的预后价值及其与其他临床病理因素的关系；2.免疫组化检测肝癌肿瘤组织及癌旁组织中LDHA蛋白表达水平。3. 构建了PKM2基因过表达和敲低的慢病毒，通过筛选构建了PKM2基因稳定敲低和过表达的肝癌细胞系。4、观察下调和上调PKM2基因表达对索拉非尼诱导的细胞增殖、凋亡、迁移、葡萄糖消耗率、乳酸产生率等的影响，并检测LDHA mRNA和蛋白表达变化通过 RT-PCR 和印迹。5. 观察ERK5特异性抑制剂XMD8-92对索拉非尼诱导的肝癌细胞增殖、凋亡、迁移、葡萄糖消耗率、乳酸产生率等的影响。RT-PCR和Blot检测PKM2和LDHA的mRNA和蛋白表达。6. 观察上调PKM2基因对增殖的影响，

结果：1. 患者分组的截止值设置为 221U/L。中位随访时间为15（范围：3-73）个月，91例患者达到随访终点。多因素分析发现，治疗前LDH水平是总生存期和无进展生存期的独立风险因素）。因素。对于治疗前乳酸脱氢酶水平高于221 U/L的患者，治疗后3个月乳酸脱氢酶水平升高的患者预后较差。治疗前高LDH与低白蛋白、大血管瘤栓、高血压有关。- Pugh分级、高T分级、高AFP水平和高总胆红素相关。2.索拉非尼治疗的肝癌组织中LDHA表达明显高于癌旁组织。3. 成功构建PKM2敲低过表达慢病毒成功转染Huh7细胞，获得稳定的转基因株。4.下调和上调PKM2基因表达可分别增强和减弱索拉非尼诱导的增殖抑制和促进作用肝细胞癌细胞。凋亡、抑制迁移、降低葡萄糖消耗率、降低乳酸产生率等。下调和上调PKM2基因表达可分别下调或上调LDHA mRNA和蛋白表达变化。5.ERK5特异性抑制剂XMD8-92可增强索拉非尼抑制增殖、促进细胞凋亡、抑制迁移、以剂量依赖性方式降低索拉非尼引起的肝癌细胞的葡萄糖消耗率和乳酸产生率。XMD8-92可降低肝癌细胞核内PKM2 XMD8-92和索拉非尼联合索拉非尼对上述基因表达的影响较索拉非尼更为显着，且呈剂量依赖性。

6.上调PKM2基因可减弱XMD8-92和XMD8-92联合索拉非尼对肝癌细胞增殖的影响，促进细胞凋亡，抑制迁移，降低葡萄糖消耗率，降低乳酸产生率。而PKM2过表达后，XMD8-92组和XMD8-92联合索拉非尼组的LDHA升高。结论：PKM2介导的糖酵解途径变化可能是索拉非尼耐药的机制之一。血清乳酸脱氢酶水平是接受索拉非尼治疗的晚期肝细胞癌患者的预后预测因子。PKM2 介导的糖酵解途径可由 ERK5 特异性抑制剂 XMD8-92 调节。