索拉菲尼白蛋白纳米制剂及其制备方法(期)

本发明涉及药物制剂领域，具体涉及一种口服生物利用度高的索拉非尼白蛋白纳米制剂及其制备方法。

背景技术：

索拉非尼（缩写为 srf）属于二芳基脲类。临床上使用的索拉非尼甲苯磺酸盐（商品名），其化学名称为4-(4-3- [4--3-()])-2--2--4 -甲苯磺酸盐，分子式为·，分子量为637.03g·mol-1。水溶性较差，微溶于乙醇，溶于聚乙烯甘油400()。索拉非尼可以靶向肿瘤细胞和肿瘤血管上的多种丝氨酸/苏氨酸激酶和受体酪氨酸激酶，同时起到抗血管生成和抗肿瘤细胞增殖的双重作用：索拉非尼一方面可以抑制受体酪氨酸激酶试剂盒和 flt-3 以及 raf/mek/erk 通路中的丝氨酸/苏氨酸激酶，并显着抑制肿瘤细胞的增殖；另一方面，它可以抑制受体酪氨酸激酶和raf/mek/erk通路的上游、下游丝氨酸/苏氨酸激酶，显着抑制肿瘤血管生成。由于其良好的抗肿瘤作用，2007年10月欧洲药品管理局（emea）、2007年11月美国食品药品监督管理局（fda）和2008年6月中国食品药品监督管理局（sfda）等先后对索拉非尼被批准用于治疗不能手术的肝细胞癌。

srf治疗肝细胞癌的临床研究表明，它能有效抑制肿瘤细胞的生长，阻止疾病的进展。它已成为一种有效的治疗药物。虽然srf毒性较小，耐受性好，但仍有一些不良反应需要在临床研究和应用中引起注意。在I期临床研究中，常见不良反应如下：疲劳40%、厌食35%、腹泻34%、皮疹/霉菌27%、hfsr（手足综合征）25%；药物相关的血压升高发生率为5%～11%（3/4度高血压为0～5%）。目前，市场上索拉非尼制剂的通用名称是甲苯磺酸索拉非尼片。这种常规剂型给药后，通常只有少量药物才能到达肝肾靶组织。要想提高药物的疗效，就必须加大剂量，但同时也增加了药物的毒副作用，降低了患者的依从性。因此，如何提高索拉非尼的靶向性，持续集中发挥药效，提高生物利用度，减少全身副作用是我们研究的重点。

纳米粒子是现代药物研究的热点。药物被分散、包裹、吸附在聚合物颗粒上，通过胶囊壁的浸出、渗透和扩散释放，也可以通过基质本身的侵蚀释放。具有靶向、缓释、改变给药途径、增加药物吸收和生物利用度、增加难溶性药物的溶解度、提高药物稳定性、减少不良反应等优点。目前国内外研究人员对索拉非尼纳米粒技术进行了研究：1)采用纳米沉淀透析法制备葡聚糖-聚乳酸聚乙醇酸嵌段共聚物索拉非尼纳米粒，研究结果表明，纳米颗粒具有良好的缓释作用，能抑制肿瘤细胞的生长；2) 采用高压均质法制备紫杉醇-索拉非尼蛋白纳米粒，与紫杉醇相比，可以抑制癌细胞的生长。与索拉非尼单体药物相比，其毒副作用明显降低；3) 开发了聚乙二醇单甲醚-外消旋聚乳酸嵌段共聚物纳米粒子，具有细胞和分子水平的靶向性和良好的缓控释效果；4)索拉非尼纳米颗粒分别用二氧化硅 350 和 pH 敏感的丙烯酸树脂 s100 制备。小鼠体内实验表明，它与索拉非尼混悬液相容，相比之下，索拉非尼纳米粒可显着提高生物利用度。其中，由ph敏感丙烯酸树脂s100制成的索拉非尼纳米颗粒的生物利用度高于二氧化硅350纳米颗粒。高的。

白蛋白常被用作靶向递送载体，以提高药物在体内的靶向性。选择白蛋白作为靶向给药载体主要是基于它是内源性物质，不会引起毒性或免疫反应；此外，白蛋白中的氨基酸通过肽键连接，并扭曲成具有网状间隙的簇。为镶嵌和携带毒品创造了有利条件。与脂质体和乳剂相比，白蛋白纳米颗粒具有更好的体内和储存稳定性。

有鉴于此，采用简单可行的方法制备索拉非尼白蛋白纳米粒具有巨大的潜在市场价值，对于开发新型索拉非尼靶向制剂也具有重要的理论意义。

技术实现要素：

为克服现有技术的不足，本发明所要解决的技术问题是提出一种口服生物利用度高的索拉非尼白蛋白纳米制剂，使其在肝癌治疗中具有良好的靶向性，提高sola Fini 的生物利用度降低了毒副作用。

为达到此目的，本发明采用以下技术方案：

本发明提供了一种口服生物利用度高的索拉非尼白蛋白纳米制剂，包括以下质量百分比组分：索拉非尼0.03～0.07%，载体材料0.5～2%，有机溶剂0.025～0.05%，交联剂0.005～0.02%，余量为生理盐水。

在本发明的一个优选技术方案中，所述载体材料为动物血清白蛋白。

在本发明的一个优选技术方案中，所述有机溶剂为无水乙醇或异丙醇。

在本发明的一个优选技术方案中，所述交联剂为戊二醛或聚乙二醇；体积分数0.1～1.0%。

在本发明优选的技术方案中，高口服生物利用度索拉非尼白蛋白纳米制剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1) 将载体材料溶解在生理盐水中制成载体溶液；

（2)用0.2mol·l-调节载体溶液的pH值到8-9，得到弱碱性载体溶液；

（3)索拉非尼溶于有机溶剂制成油相；

（4)在室温下，在/min的搅拌条件下，将油相缓慢加入微碱性载体溶液中，然后滴加交联剂固化3小时以上，得到 纳米颗粒悬浮液。

(5) 索拉非尼白蛋白纳米颗粒悬液中加入冻干保护剂冻干即得索拉非尼白蛋白纳米(srf-)制剂。

在本发明的一个优选技术方案中，步骤(1))中的载体材料与步骤(3))中的索拉非尼的质量比为10-40:1。

在本发明的一个优选技术方案中，载体溶液与油相的体积比为17-40:1。

在本发明的一个优选技术方案中，在步骤(4))中，交联剂的用量为每克载体材料2-6ml。

在本发明优选的技术方案中，步骤(4)中，索拉非尼白蛋白纳米粒悬浮液中索拉非尼白蛋白纳米粒的平均粒径为109.4～149. 4nm，平均包封率80.1～90.1%，平均载药量7.41～9.61%。

在本发明的一个优选技术方案中，所述冻干保护剂为甘露醇或海藻糖，质量分数为1-8％。

本发明的有益效果是：

本发明提供的具有高口服生物利用度的索拉非尼白蛋白纳米制剂及其制备方法控制载体溶液的质量浓度、载体溶液的pH值、油相与载体溶液的体积比和用量。交联剂。以及交联和固化时间等关键因素，制备具有高口服生物利用度的索拉非尼白蛋白纳米粒，当ph=9的质量浓度为载体溶液的0.5%时，质量浓度为1.2%油相，油相与载体溶液体积比为1:24，0.5%戊二醛用量为4ml/g载体，交联固化3小时制备 镍白蛋白纳米颗粒的平均粒径为12<

图纸说明

图1本发明具体实施例提供的具有高口服生物利用度的索拉非尼标准品的液相图；

图2本发明具体实施例提供的具有高口服生物利用度的索拉非尼白蛋白纳米粒中游离药物的液相图；

图3本发明具体实施例提供的口服生物利用度高的索拉非尼白蛋白纳米制剂中索拉非尼白蛋白纳米粒的粒径分布图；

图4为本发明具体实施例提供的具有高口服生物利用度的索拉非尼白蛋白纳米制剂中索拉非尼白蛋白纳米颗粒的电位图；

图5 本发明具体实施例提供的具有高口服生物利用度的索拉非尼白蛋白纳米制剂中索拉非尼白蛋白纳米颗粒的透射电子显微照片（50nm）；

图6 本发明具体实施例提供的索拉非尼白蛋白纳米制剂口服高生物利用度下索拉非尼白蛋白纳米颗粒的透射电子显微照片(0.5μm)；

图 7 索拉非尼白蛋白纳米粒（srf-）与相同浓度的索拉非尼混悬液（大鼠用药时间曲线对比图）。

详细方法

下面结合附图及具体实施方式对本发明的技术方案作进一步说明。

示例 1

索拉非尼白蛋白纳米粒的制备：

精确称取50mg牛血清白蛋白，溶于10ml生理盐水制成载体溶液，用0.2mol·l-调节载体溶液pH至9；准确称取12mg索拉非尼，加入900μl无水乙醇和100μ，超声溶解制备油相；室温/min搅拌下缓慢滴加417μl油相至载体溶液中；搅拌1小时后，缓慢滴加200μl0.5%戊二醛，固化3小时后，最终得到索拉非尼白蛋白纳米颗粒悬浮液。

示例 2

索拉非尼白蛋白纳米粒的制备：

精确称取50mg犬血清白蛋白，溶于10ml生理盐水制成载体溶液，用0.2mol·l-调节载体溶液pH至9；准确称取12mg索拉非尼，加入900μl异丙醇和100μ，超声溶解制备油相；室温/分钟搅拌下缓慢滴加250μl油相至载体溶液中；搅拌1小时后，缓慢滴加200μl0.1%聚乙二醇，固化3小时后，最终得到索拉非尼白蛋白纳米颗粒悬浮液。

示例 3

索拉非尼白蛋白纳米粒的制备：

精确称取牛血清白蛋白，溶于10ml生理盐水中制成载体溶液，用0.2mol·l-调节载体溶液pH至9；准确称取12mg索拉非尼，加入900μl无水乙醇和100μ，超声溶解制备油相；室温/min搅拌下缓慢滴加417μl油相至载体溶液中；搅拌1小时后，缓慢加入200μl0.1%戊二醛固化3小时后，最终得到索拉非尼白蛋白纳米颗粒悬浮液。

示例 4

索拉非尼白蛋白纳米粒的制备：

精确称取50mg犬血清白蛋白，溶于10ml生理盐水制成载体溶液，用0.2mol·l-调节载体溶液pH至9；准确称取12mg索拉非尼，加入900μl异丙醇和100μ，超声溶解制备油相；室温/min搅拌下缓慢滴加417μl油相至载体溶液中；搅拌1小时后，缓慢加入200μl1.0%戊二醛固化1小时，最终得到索拉非尼白蛋白纳米颗粒悬浮液。

例 5

索拉非尼白蛋白纳米粒的制备：

精确称取50mg牛血清白蛋白，溶于10ml生理盐水中制成载体溶液，用0.2mol·l-调节载体溶液的pH值至7.5；准确称取12mg索拉非尼，加入900μl无水乙醇和100μ，超声溶解制备油相；在室温/min搅拌条件下，将417μl油相缓慢加入载体溶液中；搅拌1小时后，缓慢加入200μl1. 0%戊二醛固化3小时，最终得到索拉非尼白蛋白纳米颗粒悬浮液。

例 6

索拉非尼白蛋白纳米粒的制备：

精确称取50mg牛血清白蛋白，溶于10ml生理盐水制成载体溶液，用0.2mol·l-调节载体溶液pH至9；准确称取12mg索拉非尼，加入900μl无水乙醇和100μ，超声溶解制备油相；室温/min搅拌下缓慢滴加417μl油相至载体溶液中；搅拌1小时后，缓慢滴加100μl0.5%戊二醛，固化3小时后，最终得到索拉非尼白蛋白纳米颗粒悬浮液。

索拉非尼白蛋白纳米粒特性的测定：

1、索拉非尼白蛋白纳米颗粒包封率和载药量测定

本发明使用高效液相色谱法测定索拉非尼的浓度。

1.1 hplc-uv色谱条件为：色谱柱为色谱柱（5μm，250*4.6mm）；流动相为乙腈：0.1%甲醇（60:4 0)；检测波长；流速0.8ml/min；柱温38℃；进样量20μl。

1.2 标准曲线和方法验证

制备 1mg/ml 索拉非尼对照品 80% 甲醇溶液备用。吸取索拉非尼对照品储备液，加80%甲醇制成0.1、0.5、1、3、6、1< @0、2<@0、5<@0、10<@0、25<@0、500μg/ml参比溶液，注入液相色谱仪，以峰面积为纵坐标，索拉非尼浓度为横坐标，绘制标准曲线。结果表明，标准曲线方程为y=131.8x-41.113，r2=0.9999。索拉非尼对照品的 hplc 图如图 1 和图 2 所示。

2、包封率和载药量的测定

取1ml实施例1的索拉非尼白蛋白纳米颗粒悬浮液，置于离心管中，离心。取上清液，用 hplc-uv 测定游离药物含量。根据以下公式计算纳米颗粒的包封率和载药量。测定结果表明，所制备的索拉非尼白蛋白纳米粒平均包封率为85.1%，载药量为8.51%。

封装率=（w -w free）/w × 100%；

载药量=（w总-w游离）/w载体×100%；

其中，w始终为药物的总重量，w free为纳米颗粒中未包含的药物重量，w载体为纳米颗粒中载体的重量。

3、索拉非尼白蛋白纳米颗粒大小和电位测量

制备的索拉非尼白蛋白纳米粒的粒径和电位由南昌大学分析测试中心测定。实施例1的索拉非尼白蛋白纳米颗粒的粒径(a)和电位(b)的测量结果如图1所示。2和图。3.

4、索拉非尼白蛋白纳米粒稳定性研究

4.1 评价指标

1)外观：用肉眼观察不同采样点的纳米颗粒样品，按照以下标准进行评价：

一种。半透明，淡蓝色乳光，无沉淀

湾 半透明，淡蓝色乳光，有少许絮凝，轻轻摇晃即可恢复

C。浊度，不可逆沉淀

2) 包封率：包封率是评价纳米粒子质量的重要指标，同时纳米粒子在储存过程中容易发生泄漏，因此需要对包封率进行监测。

3) 粒径：纳米颗粒的表面自由能很大。在储存过程中，颗粒有自发聚集和增加粒径的趋势。测试结果如图 5 和图 6 所示。

4.2 加速稳定性测试

将新制备的索拉非尼白蛋白纳米颗粒悬浮液置于安瓿中，并在 25°C 黑暗条件下储存，分别在 0、0.5、1、1.5、2 每月定期取样，并根据上述稳定性检验项目确定。结果表明，索拉非尼白蛋白纳米颗粒混悬液的包封率随着储存时间的延长而降低，粒径无明显变化。45天后底部开始出现少量沉淀，两个月后基本沉淀。

5、索拉非尼白蛋白纳米粒在大鼠体内的药代动力学

5.1 动物实验

选取10只健康雌性SD大鼠，分为两组，分别给予索拉非尼白蛋白纳米粒和索拉非尼混悬液，单次口服7.5mg/kg。在时间点灌胃后0.5、1、2、4、6、8、1<@0、12、14、24、34、48、58、72h，在离心管中取眼底血0.5ml静置半小时后，离心5分钟，-20℃取出上清血浆备用。

5.2血样处理

取出冰冻血浆样品，自然温度解冻后，取200μl血液于离心管中，加入100μl内标，1.%甲醇，超声提取，离心5min，取出上清液1ml，蒸干，用150μl80%甲醇超声复溶，再次离心5min，取上清液注射。在每个时间点测定索拉非尼的含量。

5.3 口服生物利用度比较

口服索拉非尼白蛋白纳米粒的血浆浓度高于口服混悬液。两者的药时曲线见图4。用das2.0计算药代动力学参数。索拉非尼混悬液的生物利用度为21./l*h，索拉非尼白蛋白纳米粒的生物利用度为116./l*h。结果表明，与索拉非尼混悬液相比，索拉非尼白蛋白纳米粒可以大大提高索拉非尼在体内的血药浓度和生物利用度。

6、索拉非尼白蛋白纳米粒在大鼠体内的分布特征

选择健康雌性SD大鼠30只，均匀分为两组。他们以 7.5mg/kg 的单次口服剂量给予索拉非尼白蛋白纳米颗粒和索拉非尼混悬液。灌胃后，于2、6、8、1<@0、24、58h，每组处死3只大鼠，取血清和肝脏-20℃收集备用。在每个时间点测定血浆和肝组织中索拉非尼的含量。

用选择性指数（dsi）和药物靶向指数（dti）评价制剂的靶向能力。计算如下：

dsi=t时刻靶器官内药物量/t时刻血液非靶器官内药物量

dti = 靶向制剂给药后 t 时刻靶器官内的药物量/非靶向制剂给药后 t 时刻靶器官内的药物量

在同一时间点，纳米颗粒组的dsi大于悬浮液组，说明纳米颗粒对大鼠肝脏具有良好的选择性，肝脏组织靶向性强，作用简单，毒副作用少。口服索拉非尼白蛋白纳米粒和索拉非尼混悬液2、6、1<@0、24、58h后，dsi为20.83、4 7.85、11.16、21.64、11.81，这说明索拉非尼白蛋白纳米粒具有对肝组织具有良好的靶向特性，并且索拉非尼白蛋白纳米颗粒比悬浮液具有更好的肝靶向特性，如图 7 所示。纳米颗粒组的dsi大于悬浮液组，说明纳米颗粒对大鼠肝脏具有良好的选择性，对肝脏组织的靶向性强，作用简单，毒副作用小。口服索拉非尼白蛋白纳米粒和索拉非尼混悬液2、6、1<@0、24、58h后，dsi为20.83、4 7.85、11.16、21.64、11.81，这说明索拉非尼白蛋白纳米粒具有对肝组织具有良好的靶向特性，并且索拉非尼白蛋白纳米颗粒比悬浮液具有更好的肝靶向特性，如图 7 所示。纳米颗粒组的dsi大于悬浮液组，说明纳米颗粒对大鼠肝脏具有良好的选择性，对肝脏组织的靶向性强，作用简单，毒副作用小。口服索拉非尼白蛋白纳米粒和索拉非尼混悬液2、6、1<@0、24、58h后，dsi为20.83、4 7.85、11.16、21.64、11.81，这说明索拉非尼白蛋白纳米粒具有对肝组织具有良好的靶向特性，并且索拉非尼白蛋白纳米颗粒比悬浮液具有更好的肝靶向特性，如图 7 所示。这表明纳米颗粒对大鼠肝脏具有良好的选择性，肝脏组织靶向性强，作用简单，毒副作用小。口服索拉非尼白蛋白纳米粒和索拉非尼混悬液2、6、1<@0、24、58h后，dsi为20.83、4 7.85、11.16、21.64、11.81，这说明索拉非尼白蛋白纳米粒具有对肝组织具有良好的靶向特性，并且索拉非尼白蛋白纳米颗粒比悬浮液具有更好的肝靶向特性，如图 7 所示。这表明纳米颗粒对大鼠肝脏具有良好的选择性，肝脏组织靶向性强，作用简单，毒副作用小。口服索拉非尼白蛋白纳米粒和索拉非尼混悬液2、6、1<@0、24、58h后，dsi为20.83、4 7.85、11.16、21.64、11.81，这说明索拉非尼白蛋白纳米粒具有对肝组织具有良好的靶向特性，并且索拉非尼白蛋白纳米颗粒比悬浮液具有更好的肝靶向特性，如图 7 所示。

总之，靶向制剂在体内分布特征的各项指标均表明，索拉非尼白蛋白纳米粒可以大大提高药物的生物利用度，同时具有良好的肝脏靶向性，从而实现靶向释放，降低毒性。和副作用。

本发明通过优选实施例进行描述，本领域技术人员知道，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可以对这些特征和实施例进行各种变化或等同替换。本发明并不受本文所公开的具体实施例的限制，凡属于本申请权利要求范围内的其他实施例，都属于本发明的保护范围。