科学学位口专业学位口肺腺癌吉非替尼获得性获得性耐药研究

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同意学校将论文送交国家有关部门或机构，编入相关数据库。保密厂 1、本授权书于解密当年后生效。本文被归类为非机密文件。（请在相应方框内注明“''） 论文作者署名：天津医科大学硕士论文中文 摘要 背景与目的：肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率均在世界各国全球呈明显上升趋势，由于其早期发现、诊断和治疗困难，严重威胁人类健康。且整体疗效并不理想。特别是对于一些晚期肺癌患者，往往因失去手术机会而需要大剂量化疗以延长生存期，而化疗药物显着的毒副作用也让患者深受其害。吉非替尼作为一种新型分子靶向治疗药物，可抑制表皮生长因子受体酪氨酸激酶活性在临床应用中具有很强的作用，无论是单独使用还是与化疗药物联合使用，都可以延长患者的生存时间，提高患者的生活质量. 最终会出现耐药性，从而限制其长期疗效。目前的研究表明，吉非替尼耐药性的发展可能是多种机制共同作用的结果。一些研究表明，的调控可能与肿瘤吉非替尼有关。获得性耐药的过程。是一类非编码的内源性小RNA分子，通常由20.22个核苷酸组成，广泛存在于各种生物体中，在转录后水平负调控基因表达。.

研究相继发现，参与人体的各种生命活动，可促进细胞增殖，调节细胞凋亡通路，参与细胞周期调控，参与人体代谢过程。肿瘤的发生与细胞的异常增殖、分化和凋亡密切相关，通过这些癌症相关通路发现了一些与肿瘤相关的微小RNA，如miR。12６、和平号。14 以此类推。在 调控耐药基因的相关研究中，发现 miR. 27a 和 miR-451 和 P. 糖蛋白表达与 MDRI 基因产物的激活有关，这可能导致肿瘤细胞产生耐药性。 也参与了对吉非替尼的获得性耐药的发展。有研究发现mir-128b可以靶向EGFR，在很多非小细胞肺癌肿瘤标本中都能检测到mir-128b杂合性丢失，而mir-128b杂合性丢失与吉非替尼的临床效果。疗效与生存率之间存在显着相关性。let 的过度表达。7a，和平号空间站。12６、miR-45可以控制AKT和ERK的活性，增加肺癌细胞对吉非替尼的敏感性。转染mir-126后，肺癌细胞的耐药指数可提高6倍。目前，国内外关于在吉非替尼在肿瘤获得性耐药机制中作用的研究很少。选择，

肺癌对吉非替尼的耐药性是临床常见问题，一直困扰着肺癌的治疗。本研究旨在通过对吉非替尼敏感和耐药人肺腺癌细胞株耐药差异的分析和鉴定，建立吉非替尼敏感和耐药人肺腺癌细胞株。表达谱选自天津医科大学第十学位论文，筛选出与人肺腺癌细胞对吉非替尼耐药密切相关的，用于深入研究人肺癌对吉非替尼的敏感性和耐药性。分子标志物，指导为肺癌“个体化”治疗方案奠定基础。方法：在本研究中，以对吉非替尼高度敏感的PC9细胞和三种不同吉非替尼IC50的耐药细胞系PC9/AB２、PC9/AB11、PC9/BB4为研究对象，观察四种细胞系的形态学差异倒置显微镜下流式细胞仪绘制细胞生长曲线并计算细胞倍增时间，流式细胞仪检测4株细胞的周期分布，MTT法检测吉非替尼的作用。采用4种细胞系的IC50等方法鉴定敏感PC9细胞与3种耐药细胞在生物学特性和耐药性方面的差异，以及3种细胞在生物学特性和耐药性方面的差异耐药菌株。在这个基础上，进一步应用表达谱芯片技术筛选鉴定人肺腺癌细胞中与吉非替尼耐药相关的差异表达谱。构建吉非替尼获得性耐药相关的表达载体和对照载体，转染耐药细胞株筛选获得性耐药机制相关的。

S期PC9/AB11细胞分布明显高于PC9细胞（P=O）；细胞倍增时间显着2.MTT法检测细胞IC50，敏感PC9细胞IC50为(0.0220.0１）/L，药物IC50/AB11-耐药PC9细胞为（2.070.1１）I.tmol/L，PC9/BB4细胞IC50为（0.9730.17６）gmol/L，PC9/AB2细胞IC50为（12.3831.35） ２） I.tmol/L，3株耐药细胞株与敏感株有显着差异（P<0.0５）. S期PC9/AB11细胞分布明显高于PC9细胞（P=O）；细胞倍增时间显着2.MTT法检测细胞IC50，敏感PC9细胞IC50为(0.0220.0１）/L，药物IC50/AB11-耐药PC9细胞为（2.070.1１）I.tmol/L，PC9/BB4细胞IC50为（0.9730.17６）gmol/L，PC9/AB2细胞IC50为（12.3831.35） ２） I.tmol/L，3株耐药细胞株与敏感株有显着差异（P<0.0５）.

与对照PC9细胞相比，耐药细胞系的表达谱显示PC9/AB2细胞中有19个上调的和11个下调的；PC9/AB11细胞中有4个上调的和下调的 有9个；PC9/BB4 细胞中 18 个上调的 和 7 个下调的 。4.构建miR-503的表达质粒.1(+)-mir-503并转染PC9/AB11天津医科大学硕士论文