甲基硒酸在吉非替尼耐药的非小细胞肺癌的新用途

1.本发明属于医疗技术领域，具体涉及甲基硒酸在对吉非替尼耐药的非小细胞肺癌中的新用途。

背景技术：

2.甲基硒酸（酸，msea）是一种单甲基有机硒化合物，已在许多动物和细胞模型中显示。有效的抗癌活性。甲基硒酸通过被谷胱甘肽还原为硒抗癌活性的关键代谢物甲基硒醇发挥抗癌作用，甲基硒醇被掺入蛋白质中，导致有毒蛋白质的积累，引起内部血浆网应激反应激活凋亡通路，导致癌细胞死亡.

3.吉非替尼是一种小分子表皮生长因子受体 (egfr) 酪氨酸激酶抑制剂，适用于治疗既往接受过化疗或不适合化疗的 egfr 突变阳性局部晚期或转移性非小细胞肺癌()。吉非替尼是 egfr 突变肺癌的一线治疗药物，平均 10 到 14 个月后会产生耐药性。而阿法替尼、奥希替尼等二、第三代egfr突变阳性肺癌靶向药物也在出现吉非替尼耐药后使用，相同的耐药现象在不同时期出现，且价格昂贵。如何针对吉非替尼耐药机制发现新的治疗方法和药物，提高治疗效果，延长患者生存期，已成为亟待解决的问题。

技术实现要素：

4.本发明的目的是提供甲基硒酸在吉非替尼耐药的非小细胞肺癌中的新用途。在应用中，癌症具体可以是对吉非替尼耐药的egfr阳性非小细胞肺癌。

5.本发明的第一方面是提供甲基硒酸在制备抑制肿瘤制剂中的应用；在一个具体的实施方案中，抑制是通过抑制肿瘤细胞糖酵解的水平从而抑制肿瘤增殖；在另一个具体的实施方案中，抑制是通过抑制肿瘤细胞中的met磷酸化来实现的；在另一个具体的实施方案中，对肿瘤细胞的抑制是通过抑制肿瘤细胞中的topk磷酸化来实现的；在另一个具体的实施方案中，抑制是通过抑制肿瘤细胞中的akt磷酸化来实现对肿瘤细胞的抑制；在上述的一个具体实施方案中，进一步地，所述肿瘤为肺癌，优选为非小细胞肺癌，更优选为吉非替尼耐药的非小细胞肺癌。

6.本发明的第二个方面是提供甲基硒酸在制备用于抑制肿瘤细胞中met磷酸化的制剂中的应用；优选为肺癌，更优选为非小细胞肺癌，最优选为吉非替尼耐药的非小细胞肺癌。

7.本发明的第三方面是提供甲基硒酸在制备抑制肿瘤细胞topk磷酸化制剂中的应用；优选为肺癌，更优选为非小细胞肺癌，最优选为吉非替尼耐药的非小细胞肺癌。

8.本发明的第四方面是提供甲基硒酸在制备抑制肿瘤细胞中akt磷酸化制剂中的应用；优选为肺癌，更优选为非小细胞肺癌，最优选为吉非替尼耐药的非小细胞肺癌。

9.本发明的第五方面是提供甲基硒酸在制备抑制肿瘤细胞糖酵解水平的制剂中的用途

;优选地，肿瘤为肺癌，更优选为非小细胞肺癌，最优选为吉非替尼耐药的非小细胞肺癌。

10.本发明使用的甲基硒酸(cas:-57-9)结构式如式(ι)所示；(ι)本发明的有益效果是1）本发明首次揭示甲基硒酸具有抑制吉非替尼耐药的非小细胞肺癌生长的作用，对主要扩增蛋白met的活性有良好的作用。引起吉非替尼耐药 可降低对吉非替尼耐药的非小细胞肺癌的糖酵解水平；2）本发明是开发一种基于甲基硒酸的抗吉非替尼耐药的非小细胞肺癌。细胞肺癌药物提供了科学依据，具有很大的应用价值。

图纸说明

11.图1甲基硒酸对小鼠体重的影响。

12.图2甲基硒酸对肿瘤组织重量的影响。

13.图3硒酸甲酯对肿瘤组织的影响体积效应。

14.图4甲基硒酸(msea)、亚硒酸钠()、硒代蛋氨酸(,)、硒-甲基硒代半胱氨酸酸(se-,semc)对吉非替尼耐药细胞存活率的影响。

15.图。 5 硒酸甲酯对吉非替尼耐药细胞met和topk、akt蛋白的影响。

16.图6甲基硒酸对吉非替尼耐药细胞糖酵解的影响。

详细实现

17.下面结合附图和具体例子对本发明的具体实施方式和技术方案作进一步的详细说明。需要特别指出的是，凡是类似的替换和变化对于本领域的技术人员来说都是显而易见的，都认为包括在本发明的范围内。本发明的方法和应用已经实施通过优选实施例的描述，相关人员显然可以在不脱离本发明的内容、精神和范围的情况下，对本文所述的方法和应用进行改变或适当的改变和组合来实现和应用本发明的技术。

18.以下实施例中使用的实验方法，除特别说明外，均为常规方法；以下实施例中所用的试剂、生物材料等，除非另有说明，均可以从商业渠道获得。

19.来自pasi a的耐吉非替尼人肺癌细胞。 j

a

nne（美国哈佛医学院）并且已经过验证。

20.实施例1甲基硒酸对吉非替尼耐药小鼠非小细胞肺癌生长的抑制作用。

21.试验方法：雄性nvsg高免疫缺陷小鼠（北京微商立德生物科技有限公司），20、6周龄、5岁

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106个细胞等体积混合，皮下注射到小鼠右侧，用游标卡尺测量肿瘤体积。当肿瘤体积约为100-时，将小鼠随机分为对照组和甲基硒酸治疗组。对照组给予相应溶剂，甲基硒酸治疗组灌胃给予每日3 mg se/kg，隔日测量小鼠体重和肿瘤体积

。实验结束后取出肿瘤，一部分保存在10%福尔马林中，其余部分在液氮中速冻，-80℃保存。

22.以肿瘤体积和肿瘤重量作为评价标准，从图2和图3可以看出，甲基硒酸能显着抑制肿瘤组织的生长，对患者体重无明显影响。老鼠。 （见图1)。

23.结果表明，在吉非替尼耐药细胞的皮下成瘤模型中，甲基硒酸治疗对吉非替尼耐药的非小细胞肺癌具有良好的治疗效果。

24.实施例2甲基硒酸抑制吉非替尼耐药的非小细胞肺癌的生长。

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25.测试方法：体外，用0、2、4、6、8μm甲基亚硒酸、亚硒酸钠，用硒代蛋氨酸处理细胞和硒-甲基硒代半胱氨酸24小时，结晶紫染色检测细胞活力。

26.如图所示的结果。甲基硒酸处理可显着降低细胞活力并显示出浓度依赖性效应。结果表明，甲基硒酸可抑制吉非替尼耐药的非小细胞肺癌的生长。

27.实施例3甲基硒酸抑制细胞内met、topk和akt蛋白的磷酸化。

28.测试方法：用0、2、 4、6、8μm甲基硒酸处理细胞24小时，取细胞，提取总蛋白，进行蛋白质印迹。在 中，检测p-topk的一抗对于anti-p-topk(cst, 4941)，检测p-met的一抗是anti-p-met(cst, 3077)，检测p-akt的一抗是anti-p-met(cst, 3077)) p-akt(cst, 4060)，检测β-的一抗是anti-p-met(cst, 3077)) -β-(cst, 4970), 二抗为兔二抗(mbl ,458)。最后使用ecl发光试剂盒进行开发。

29.图5显示甲基硒酸处理后p-topk、p-met和p-akt的水平显着降低，并且呈剂量依赖性。结果表明，甲基硒酸可抑制吉非替尼耐药的非小细胞肺癌中met、topk和akt蛋白的磷酸化。

30.@ >示例4 甲基硒酸降低细胞内糖酵解水平。

31.测试方法：使用0、2、4、<@细胞用6、8 μm甲基硒酸处理24小时，细胞水平使用安捷伦糖酵解速率检测试剂盒按照说明书测量糖酵解。

32.图。 6 结果表明，甲基硒酸处理后细胞糖酵解水平以剂量依赖性方式降低。结果表 甲基硒酸可抑制吉非替尼耐药的非小细胞肺癌的糖酵解水平。

33.以上仅为本发明的较佳实施例。需要指出的是，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明的技术原理的前提下，还可以进行一些改进和修改，这些也应视为在本发明的保护范围之内。