肝癌放疗增敏药物与放疗联合应用的研究

摘要： 研究背景与目的：肝癌是我国主要的恶性肿瘤，年发病率为10-150/10万人。它也是世界上常见的疾病，每年约有26万例原发性肝癌新发病例。我国每年约有11万人死于肝癌，占全球肝癌死亡人数的45%。大多数肝癌患者处于中晚期，手术率只有5%-10%左右。随着放疗设备和技术的发展，以及适形放疗的临床应用，放疗逐渐成为肝癌非手术治疗的主要方法之一。然而，由于肝癌细胞的相对抗辐射性，肝癌的根治剂量明显高于肝脏的耐受剂量，特别是在肝癌的中晚期，限制了放疗剂量的增加，导致肝癌的放疗效果较差。因此，如果能增加肝癌细胞放射敏感性的药物与放疗联合使用，从而相对增加肝脏耐受剂量，是提高晚期肝癌疗效的重要手段之一，在临床上具有重要意义。临床应用价值。. 放射增敏药物的研究一直备受关注，而亲电硝基化合物的早期研究因其高毒性而限制了临床应用。对放射增敏机制的进一步研究发现，肿瘤细胞的放射敏感性与细胞固有的分子机制有关，因此能够特异性作用于肿瘤血管生成和信号转导通路的分子靶向治疗药物受到关注并成为研究热点. ，相关研究成果显示了放疗增敏的未来发展潜力。

分子靶向药物是近年来医学肿瘤学领域的重大进展之一。并在部分肿瘤的治疗上取得重大突破。然而，关于分子靶向药物与放疗联合应用的相关研究报道并不多。随着对放射敏感性基因的进一步研究和认识，分子靶点与细胞信号通路和放射敏感性的关系受到更多关注。据报道，细胞 PI3K/Akt 信号通路在细胞放射敏感性中起着非常重要的作用。RAS/RAF/ERK信号通路与肿瘤细胞放射敏感性之间的关系是最近受到关注的另一条通路。最近的研究发现，阻断RAF-1或其介导的信号通路中的其他信号分子位点，可以显着提高一些抗辐射肿瘤的辐射敏感性。关于分子靶向药物放射增敏机制的认识，有报道认为分子靶向药物放射增敏的理论基础与以下机制有关：①抑制肿瘤细胞增殖和修复放射损伤。放射损伤后肿瘤细胞启动的损伤修复机制与细胞信号转导通路中的许多关键靶分子有关。②重新分配肿瘤细胞周期。③细胞毒性或诱导细胞凋亡。许多分子靶向药物可以直接或间接诱导细胞凋亡并减少克隆细胞的数量。与辐射结合，它们会发挥空间协同效应，从而增加辐射的敏感性。④ 抑制肿瘤血管生成。主要作用于内皮细胞生长因子VEGF。

甲苯磺酸索拉非尼片，中文又称多吉美，是一种新型的多靶点抗肿瘤药物和多激酶抑制剂（-）。ERK信号通路直接抑制肿瘤生长；另一方面，它通过抑制VEGF和血小板衍生生长因子（PDGF）受体阻断肿瘤血管生成，间接抑制肿瘤细胞生长。目前，索拉非尼治疗肝癌的3期临床试验已于2006年底完成。除肝癌和肾癌外，近期国内的一些研究也探讨了索拉非尼对肺癌、前列腺癌的治疗作用。癌症、恶性黑色素瘤和乳腺癌。国外文献中有一些关于索拉非尼联合化疗治疗肾癌和结肠癌的报道，但尚无索拉非尼联合放疗对肝癌细胞作用的报道。因此，设想通过实验方法观察索拉非尼对体外培养的肝癌细胞系的放射增敏作用。方法：1、MTT实验观察药物对细胞的生长抑制和杀伤作用，了解不同浓度和作用时间的药物抑制程度和IC50值，初步观察细胞不同浓度药物作用下的生存曲线。2、细胞集落形成率实验是通过为细胞选择合适的药物浓度和不同放疗剂量的组合，观察细胞形成的集落数量，观察细胞存活曲线。

3、PI染色法和FCM检测实验处理后细胞周期分布的变化；采用-FITC标记和PI染色双重染色法，通过FCM检测，检测和分析实验处理后细胞的凋亡率。初步探讨索拉非尼对肝癌细胞株放射增敏作用的相关机制。结果：1、MTT实验结果表明，索拉非尼单独使用时对细胞有抑制作用。抑制作用的程度与药物浓度有关，也与作用持续时间有关。其3天和4天的IC50值分别为11.5ug/ml和8ug/ml。从细胞存活曲线实验的结果来看，其对细胞的抑制作用程度随药物浓度的增加而增强，大致呈线性关系。从作用时间来看，抑制作用的强度也随着作用时间的延长而增加。2、细胞集落形成率实验结果：9ug/ml 用于根据线性二次模型拟合照射后的细胞存活分数（SF），为左下方略带弧度的曲线。两条曲线的参数（α、β、α/β）比较（均P0.05)具有统计学意义。对于生存率SF2的比较，单纯照射组为0.5125±0.0106，索拉非尼+照射组为0.4607±0.0094，

实验数据的统计分析表明，索拉非尼对肝癌细胞系具有放射增敏作用。3、用或不用索拉非尼6.0Gy照射细胞后，细胞周期分布结果显示索拉非尼具有去环化作用。与单纯照射组相比，G2/M期受阻细胞比例显着降低。细胞凋亡实验表明，索拉非尼照射组的细胞凋亡率为：14.45±2.72，较单独用药（细胞凋亡率：10.37±2.28)或单纯照射组（细胞凋亡率10.06±1.30显示细胞凋亡率显着增加，方差分析（均P=0.@ >008) 具有统计学意义。结论：1、MTT试验结果表明，索拉非尼单药对肝癌细胞株的生长有抑制作用，抑制程度与肝癌细胞株相似。药物浓度是相关的，随着药物浓度的增加，抑制作用增强。还与药物的持续作用时间有关。在2-5天的作用时间内，随着药物作用时间的延长，对细胞的抑制作用也相应。药物对细胞的抑制作用与药物浓度具有相似的线性关系。2、克隆形成率实验结果表明，索拉非尼对肝癌细胞系具有放射增敏作用。结合MTT实验的结果，其致敏模式被认为是在1+12模式下叠加增强的。3、通过FCM分析细胞周期分布和凋亡实验，发现索拉非尼对被照射细胞具有去循环作用。作用还增加了细胞的凋亡率。结合索拉非尼药理作用机制分析，其对肝癌细胞系的放射增敏机制及其对放射后细胞脱环和抑制放射损伤后修复的作用，增加细胞凋亡率。通过FCM分析细胞周期分布和细胞凋亡实验发现，索拉非尼对照射细胞具有去循环作用，阻断作用也增加了细胞的凋亡率。结合索拉非尼药理作用机制分析，其对肝癌细胞系的放射增敏机制及其对放射后细胞脱环和抑制放射损伤后修复的作用，增加细胞凋亡率。通过FCM分析细胞周期分布和凋亡实验，发现索拉非尼对照射细胞具有去循环作用，阻断作用也增加了细胞的凋亡率。结合索拉非尼药理作用机制分析，其对肝癌细胞系的放射增敏机制及其对放射后细胞脱环和抑制放射损伤后修复的作用，增加细胞凋亡率。