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自问世以来,它在治疗各种难治性疾病方面显示出巨大的潜力。但有时候CRISPR会“出错”,比如切掉DNA的其他部分,也就是所谓的脱靶效应。研究人员开发了一种新方法来识别这些不必要的切割。当CRISPR切割时,DNA被破坏,细胞将许多不同的DNA修复因子聚集到基因组中特定的治疗靶点,以修复断裂并将切割端连接在一起。如果能找到这些DNA修复因子的位置,就可以确定CRISPR的切割位点。
根据这个想法,研究人员探索了一组不同的DNA修复因子。发现MRE11是最早到达DNA切割位点的蛋白质之一。MRE11就像藏宝图上的一个引导点,告诉研究人员蛋白质的去向。研究人员利用MRE11开发了一种新的DISCOVER-Seq技术。人类基因组如此巨大,如果把所有的DNA序列都打印出来,那将是一本16层楼的书。用CRISPR切割DNA就像试图从书中删除特定页面上的特定单词。这就像大海捞针。然而,令人惊讶的是,MRE11可以准确地删除特定单词的所有字母。
与以往只能通过实验室细胞培养检测脱靶效应不同,这种方法依靠细胞的自然修复过程来识别切口,因此侵入性更小,可靠性更高。值得注意的是,DISCOVER-seq是第一个直接从任何活组织的CRISPR编辑工具中找到切割位点的方法。这意味着它可以用来找到任何切割位置,并且可以轻松应用于以前难以使用的不同系统。
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