实用医院临床杂志2014年7月第11卷第4期71突变特异性抗体检测肺腺癌EGFR基因突变的临床应用

71种突变特异性抗体在肺腺癌EGFR基因突变检测中的临床应用，实用医院临床杂志，2014年7月，医学科学院，四川省人民医院病理科，四川成都；2. 泸州医学院病理教研室，四川泸州） 【摘要】 目的评价两种表皮生长因子受体（EGFR）基因突变特异性抗体对肺腺癌石蜡组织样本的检测价值。方法使用突变和外显子19 E746收集76份临床肺腺癌石蜡组织标本。A750缺失特异性抗体用于免疫组化标记，提取DNA用于ARMS法EGFR突变分析。结果 76 份石蜡组织样本中，ARMS法检测出突变14例，l9外显子缺失14例，突变1例，野生型47例。通过免疫组织化学检测突变和外显子19 E746。A750缺失的敏感性为79%，特异性分别为92%和79%。阴性预测值分别为 95% 和 94%。如果阳性阈值设置为 2+，则突变抗体没有假阳性病例（8/8)，19 外显子 E746-A750 缺失的抗体假阳性病例（7/8)，检测阳性病例的特异性为94%（15/16). 特异性分别为 92% 和 79%。阴性预测值分别为 95% 和 94%。如果阳性阈值设置为 2+，则突变抗体没有假阳性病例（8/8)，19 外显子 E746-A750 缺失的抗体假阳性病例（7/8)，检测阳性病例的特异性为94%（15/16). 特异性分别为 92% 和 79%。阴性预测值分别为 95% 和 94%。如果阳性阈值设置为 2+，则突变抗体没有假阳性病例（8/8)，19 外显子 E746-A750 缺失的抗体假阳性病例（7/8)，检测阳性病例的特异性为94%（15/16).

结论 用EGFR突变特异性抗体对石蜡组织样本进行免疫标记可作为临床筛查突变阴性病例的有效方法。【关键词】 肺腺癌；表皮生长因子受体；基因; 突变; 免疫组化 04-0071-05 FR.—danl,,—hua1,,,.,.,&ple',,;2.y,e,,na)【】【】nt——LC. 米他 FR，一，-（FFPE）。. , DNA R- tem (ARMS)。请，-。

,,——。埃尔坦。f79%%。％ ％ ％ ％ 一。——李。2+HC。-(8/ 8).one-(7/8).%(15/ 16)%..ve one.[];(EGFR);基因;;非小细胞表皮生长因子受体（EGFR）基因突变是肺癌患者最重要的两个基因突变来源（肺癌患者诊断、治疗和特殊检测的大部分存活样本，以及肺癌骨转移患者，由于到骨组织脱钙，形式是第19外显子缺失（E746-A750，15-bp缺失理，导致DNA断裂，影响后续基因检测结果，目前缺失）和密码子点突变外显子 21 的 858 个具有可用于标记 EGFR 基因突变 ()¨] 的特异性单克隆抗体，该蛋白是肺腺癌患者 EGFR 基因突变的原因。

如果用免疫组化方法检测EGFR基因突变，90%以上。EGFR基因状态的评价与肺癌患者突变蛋白治疗结果的可靠性，将直接关系到上述患者基因检测和治疗方案的选择。它的主要检测方法提供了更多的方法。它是直接测序法和PCR法，但这些方法复杂，对实验室材料和方法的要求很高，而且价格昂贵。1.1 四川省人民医院2010-2013年材料选择在基层医院推广应用难度较大，使部分患者失去了有效治疗的机会。由于76例肺腺癌病理诊断标本的胸腔积液，45名男性有脱落的肿瘤细胞、细针抽吸组织和转移部位样本（59%），31名女性（41%）；年龄≤65岁65岁以上50例（66%），>65岁6例（34%）；53名患者【资助项目】四川省卫生厅科研基金项目（编号： ）；泸州市科技局项目（No.:2013-S-47)无吸烟史（70%），23名患者目前或曾经吸烟[通讯作者]黄娟（30%）。其中， 35例手术标本，72例支气管镜实用医院临床杂志，2014年7月，第11卷，第4期，39例标本，2例胸腔积液脱落细胞标本来源包括HEX信号的上升，如果样本反应管有FAM信号，肺（59例），

胸腔积液（2例）和骨组织（4例）。2 结果 1.2 ARMS 法检测 EGFR 基因突变 5 m 厚 2.1 ARMS VIS 法检测 EGFR 基因突变 3~8 片 ARMS 石蜡包埋组织用于检测 1.5ml EP 管中的 EGFR 基因状态作为标准对照，76该组病例最初包括在内。采用本公司DNA提取试剂盒提取原发性或继发性肺腺癌的石蜡组织标本，检测EGFR基因突变DNA。操作按照说明书进行。28例DNA质量评估和浓度调制，其中突变14例，外显子缺失病19例：分光光度计检测（型，14例，突变1例，野生型47例，见图1。） 样品和波长吸光度值，2。2 免疫组化法测定EGFR基因突变以评价其纯度和含量。2.2.1 EGFR-突变检测结果每份样本的DNA符合2.2.1 EGFR-/在1.8-2.0，用双蒸水调整DNA浓度特异性抗体进行免疫组化标记，阳性检测到1.5～3ng/l。采用厦门爱德ADx。ARMS III out率为14%，敏感性为79%，特异性为92%，EGFR基因突变检测试剂盒准确率为92%，阳性预测值为69%，阴性预测值为95%。用双蒸水调整免疫组化标记特异性抗体DNA浓度，阳性检测至1.5～3ng/l。采用厦门爱德ADx。ARMS III out率为14%，敏感性为79%，特异性为92%，EGFR基因突变检测试剂盒准确率为92%，阳性预测值为69%，阴性预测值为95%。用双蒸水调整免疫组化标记特异性抗体DNA浓度，阳性检测至1.5～3ng/l。采用厦门爱德ADx。ARMS III out率为14%，敏感性为79%，特异性为92%，EGFR基因突变检测试剂盒准确率为92%，阳性预测值为69%，阴性预测值为95%。

如果为阳性，则总共有 21 个突变位点。反应体系的实时定量阈值为20，无假阳性病例，灵敏度为57%，如图PCR机扩增和数据采集。2. 1.3 EGFR基因突变特异性抗体免疫组化 2.2.2 EGFR基因外显子19突变检测结果 取41xm厚的石蜡组织块切片，切片脱蜡清洗，EGFR基因外显子19-A750缺失后，在 pH 6.0 的柠檬酸盐缓冲液中，使用 15 差异抗体通过微波修复进行免疫组织化学标记。阳性检出率为10分钟，3% H 0 阻断组织内源性过氧化物酶15分钟。14%，灵敏度 79%，特异性 79%，准确度 79%，正铃。切片用人苏木素染色液复染，自来水预测值为46%，阴性预测值为94%。如果将阳性阈值设置为 25 分钟，组织切片浸入 0.25% 氨水中会变蓝，磷酸盐会逐渐升高，会出现 1 例假阳性，灵敏度为 50%，如图图 3. 冲洗后，滴加特异性一抗。用2.3 ARMS法和IttC法对两种兔单克隆抗体进行比较。根据临床医生的需要，特异性鉴定人EGFR基因外显子19提供了所有突变结果。EGFR 突变和 No. 19 E746-A750 缺失的结果（克隆 No. 6B6；。外显子。A750 缺失特异性抗体免疫组化，MA)和21号外显子点突变的化学标志物综合判断为阳性。比率为 37%，（克隆 43B2；ogy）。

一抗的敏感性为79%，特异性为79%，准确度为79%。阳性预测用抗体稀释液稀释（稀释倍数1:150)，4oC冰值55%，阴性预测值95%，见表1、表2。在培养箱中孵育过夜。用缓冲液3次，滴二抗（。本组共研究4例肺腺癌骨转移瘤，用抗体AL/DAB+进行免疫标记。，4例中1例检出21号/，） ，置于湿盒中，与外显子37突变孵育，其余3例为阴性病例，用AMRS孵育30分钟，用磷酸盐缓冲液冲洗后加入新鲜，与制备的DAB法检测结果一致。两种显色试剂用于胸水脱落细胞样品的突变检测，室温显色5-10分钟。在显微镜下控制显色时，两种方法均为阴性。其间，自来水充分冲洗，梯度酒精脱水。用安装液安装载玻片。3 讨论 1.4 免疫组化结果评分0分：无染色或变异率约40%。肺腺癌患者的个体化治疗 10%的肿瘤细胞细胞质和/或细胞膜染色较弱；2分：治疗取决于对患者遗传状况的临床评估。J. >10% 的肿瘤细胞有中度细胞质和/或细胞膜染色；3 本组ARMS检测结果显示EGFR基因l9、2l外显率评分：>10%的肿瘤细胞具有强细胞质和/或细胞质亚型。总体突变率为37%，与文献报道的结果相似。

染色。但是，分子生物学方法检测基因状态的成本很高，结果以1.5来判断。ARMS方法复杂，样本要求高。不能在所有医院推广，应该设计。每个 8 个连接的 PCR 检测一个样本，使用管 1 到 7。对于肿瘤组织过少的活检样本，如果无法安装相应的EGFR基因突变检测和内控试剂，且突变满足200个以上肿瘤细胞的要求，则以FAM信号指示分子水平检测的灵敏探针, 内部控制由 HEX 信号决定。指导。无法达到内感受性来识别突变的存在或不存在。免疫组化控制用作试剂的质量控制，DNA 质量和操作本身。检测的选择对肿瘤细胞的数量没有特殊要求，可以定位。目前，人类EGFR基因相对保守。待测样本的内控可在大部分病理实验室进行，价格经济，结果解读见《实用医院临床杂志》，2014年7月，第11卷，第4期，第75期。 MRI诊断胎儿胼胝体发育不全 邹丽华，康2a杨家祥，赵2b石涛2b（1.四川省乐山市市中区妇幼保健院医学影像科，四川省乐山市；2 . 四川省妇幼保健院放射科, b. 成都功能影像科,

方法对17例超声诊断为胼胝体发育不全的胎儿进行分析，并结合磁共振（MRI）、产后或引产的结果进行比较。结果 17例完全性Ace，6例和部分病例超声确诊；2例完全Ace和1例部分Ace超声表现与MRI表现相同，5例完全Ace和7例部分ACC与引产或产后结果一致；染色体检查13例，染色体异常4例；9例有其他畸形或多种畸形并存。结论产前超声在诊断胎儿Ace尤其是完全Ace方面具有一定优势。胎儿王牌经常与其他畸形相结合。MRI是诊断胎儿Ace的必要方法。【关键词】 胎儿；胼胝体; 发育不全; 核磁共振；产前超声 -04 XI um —huaL, ,- , ,.nd.- ,,;2a.y;2b.nd, ,,)【】 (US) (Ace)。— . ,. — 罗德岛。— . G，， 。, . , o—。【】;;;ging;hy¨·-'生病了……-·"'111·一*11I"IIh.

患病的_。'。II突变，其余3例为突变阴性病例，采用AMRS法检测[J]. g, 2011, 141: 476-480。结果是一致的。说明免疫组化方法可以有效检测骨组[3]Pna Q, PaoW,。- 编织这种脱钙样品。分子水平检测方法一般流程繁琐、耗时长、实验室要求高，而免疫组别[J]. , 2005, 7: 396-403。化学编织法相对简单，费时，对实验室来说并不特殊[4]，，。按要求。

[J]. , 本研究表明免疫组化筛选EGFR的特殊方法2010, 12: 169-176。杂合突变蛋白的阴性预测值高，只能检测到已知突变[5]LiAR,,,eta1。- 蛋白质，具有临床治疗指导价值等：[J]．，突变无法测量，方法检测的敏感性和特异性2008，10：。不太理想，如何提高该方法的敏感性和特异性[6]胡红林，邓颖，任刚等。吉非替尼治疗晚期非小细胞肺癌的临床治疗异质性值得关注进一步研究。效率分析[J]．实用医院临床杂志, 2007, 4(5): 36-37. [7] Tzu—,—, Yih—, eta1.—[参考文献] n·[J]. [1],,,eta1 .rre—, 2012, 7:993-1000.[J]., 2007, 7: