MET驱动突变癌症的临床特征、诊断策略和靶向治疗方案

受体酪氨酸激酶c-MET（以下简称MET）的功能障碍已被证明是肿瘤发生的驱动因素。与许多其他原癌基因相比，

MET的显着特点是三种不同类型的基因突变可导致肿瘤，包括扩增、突变和融合等。

. 随着癌症MET驱动突变诊治的快速发展，《 》（）发表了MET基因综述文章，系统阐述了MET驱动突变的临床特征、诊断策略和靶向治疗在癌症中。计划一。

一、MET 扩增

MET扩增是指MET拷贝数扩增，包括全染色体复制和局部区域基因复制。全染色体重复是多倍体

(

)

肿瘤细胞的7号染色体有多条，多倍体在生物学上不能作为驱动基因。扩增是局部或区域基因的复制，断裂-融合-桥接机制是基因扩增的主要原因。与多倍体相比，MET扩增可作为驱动基因和EGFR-TKI耐药的主要机制之一。MET 基因拷贝数是一个连续变量，阳性阈值的定义会影响发生率、与其他基因亚型的重叠及其作为 MET 抑制剂疗效预测因子的能力。MET扩增的诊断、临床特征和治疗如下所述。

|ET扩增检测

可以使用多种技术检测 MET 扩增，包括

荧光原位杂交

（鱼），

实时定量 PCR

(QRT PCR) 和

新一代测序

(NGS)（见图 1）。

荧光原位杂交 (FISH)

FISH是一种常用的检测技术。其基本原理是使用荧光团与标记的 DNA 探针偶联来识别特定序列的基因组区域。它通常用于检测福尔马林固定的石蜡包埋 (FFPE) 组织切片。. 当待检测的基因组序列暴露于荧光标记探针时，会发出相应颜色的荧光。荧光信号的数量代表基因的拷贝数。

FISH检测MET扩增的主要方法有两种。第一种方法直接测量 MET 基因拷贝数 (GCN)。目前临床研究使用最多的标准，即平均每个细胞有5个或更多MET基因拷贝（MET GCN≥5)可视为MET扩增，也有学者提出平均拷贝数为≥6 甚至15也可以定义为MET扩增。可惜这种通过拷贝数确定扩增的方法无法区分是多倍体还是局部扩增。第二种方法是设置MET/CEP7≥2. 0为标准MET扩增是目前最广为接受的标准，有学者根据MET/CEP7值将扩增程度分为三组：低扩增（1.8-2. 2) ,

下一代测序 (NGS)

与适用于 FISH 的标准类似，对于 MET 扩增的单一定义也没有达成共识。目前大部分平台都采用读取测量方式。这种方法是基于读长信号与样本中染色体片段拷贝数成正比的原理，利用一些生物信息学方法进行计算。在性别和特异性方面仍然存在一定的局限性。一些平台还将使用来自同一患者的良性组织或血液样本作为对照，以进一步提高灵敏度。NGS的优势在于除了能够同时评估数百个基因的变异外，还具有高分辨率和来自众多复制染色体的能力。识别培养基中局部基因扩增的能力。

图1.MET扩增肿瘤诊断

| 临床病理特征

初级MET扩增

已经在多种实体瘤中发现了原发性 MET 扩增。根据肿瘤基因组计划（TCGA）和数据库提供的数据，

MET扩增在非小细胞肺癌中较为典型（），检出率约<1-5%；在胃癌中约 <1-10%；约2-4%的结肠癌（CRCs）、约13%的I型2型肾乳头状癌（）和约3%的II型肾乳头状癌也检测到MET扩增，食管癌检出率低，肝细胞癌。

. 在许多恶性肿瘤中，MET 扩增意味着预后不良。研究发现，细胞MET扩增程度越高，肿瘤对MET驱动的依赖性越强。MET扩增高（MET/CEP7≥5，FISH法）的患者很少合并其他癌基因驱动的变化（如EGFR突变或ALK融合），MET扩增低（MET/CEP7≥1.8，≤< @2.2，FISH 法）和适度放大（MET/CEP7>2.2，

获得性MET扩增

MET扩增可以

初级也可以是其他原癌基因驱动基因（EGFR）的次级激活，这也是EGFR等TKI耐药机制之一

. 根据不同检测方法和平台提供的数据，接受一到三代EGFR TKI靶向治疗的患者中，大约有5%到20%会出现MET扩增。EGFR突变的肿瘤细胞可以绕过EGFR TKI（吉非替尼或厄洛替尼等）的PI3K通路，激活MET的旁路信号通路，PI3K通路也可以通过MET介导的HER3信号通路进一步激活。还发现 MET 扩增是 ALK 融合阳性癌症患者对 ALK 抑制剂耐药的机制之一。此外，在接受抗EGFR单克隆抗体治疗的结肠癌患者和接受EGFR和BRAF抑制剂联合治疗的BRAF突变结肠癌患者中，也可以检测到MET扩增。当患者接受 EGFR TKI 治疗时，可以发生 MET 扩增的二次激活，这种激活也可以发生在肿瘤细胞的亚克隆群体中。当 NGS 检测的样本与 MET 扩增和非 MET 扩增的肿瘤细胞混合时，这个结果可能低估了 MET 扩增的程度。为了进一步提高准确度，建议结合FISH或单细胞测序进行补充。

|靶向治疗

MET扩增水平与MET抑制剂的功效呈正相关。

1）初级MET扩增

1001研究是最早的关于MET抑制剂疗效与MET扩增程度相关性的研究。将患者分为低扩增组（MET/CEP7≥1.8，≤2.2），中等扩增组（MET/CEP7>2.2，

最显着的总体临床获益也出现在高度扩增组，ORR 为 40%，中位无进展生存期 (PFS) 6. 7 个月，以及低扩增和中度扩增组 ORR分别为 33% 和 14%，PFS 分别为 1.8 个月和 1.9 个月

（图片2）。

图2.MET-靶向治疗及肿瘤患者疗效

2）获得性抵抗

为依赖另一个驱动基因而出现

对于MET继发性激活的肿瘤患者，原发驱动基因与MET信号通路联合治疗可能有效

. 例如，EGFR突变患者在使用EGFR TKI后产生耐药性。如果耐药是由 MET 扩增引起的，那么联合使用 EGFR TKI 和 MET 抑制剂可能是一个有效的解决方案。研究显示，EGFR突变和MET扩增耐药的患者（FISH或NGS检测结果MET /CEP7≥2或GCN≥5），与奥希替尼和沃利替尼联用时ORR高达30%） 另一项研究表明接受第一/二代 EGFR TKI 治疗的患者出现 MET 扩增耐药，接受吉非替尼和特波替尼联合治疗时 ORR 可高达 67%。其他药物如 EGFR 和 MET 双特异性抗体 JNJ-372 在 EGFR 耐药进展的患者中也显示出良好的活性。

总而言之，

MET 扩增水平高表明使用 MET 抑制剂会有更好的疗效。该预测模型对于单独使用 MET 抑制剂或联合使用 MET 与其他 TKI 具有预测意义。

. 因此，我们再次呼吁尽快实现MET扩增的标准化定义，不仅要达到诊断意义，而且要尽可能多地识别出MET变化驱动的恶性肿瘤患者并区分其扩增。度，以便它们可以从 MET 的目标进行更改。治疗好处。

MET突变

激活突变可以发生在 MET 基因的不同位置，包括激酶结构域、外显子 14 侧翼的内含子剪接位点和细胞外结构域（见图 3）.

图3.MET突变

激酶域突变

MET 突变于 1997 年首次在遗传性乳头状肾细胞癌 (PRCC) 患者中发现。这些种系突变包括 /Y、、、和 /N/V。

MET激酶结构域的突变增加激酶活性，导致表型转化或肿瘤形成

. 除了原发性突变外，在MET激酶活性区也可发生EGFR TKI耐药的继发性突变。在非小细胞肺癌中，研究发现 MET 外显子 14、, 和 都可以介导 EGFR TKI 耐药。唑替尼耐药。

MET 14 外显子突变

MET 激活导致 MET 激酶激活环中由外显子 14 编码的近端膜结构域中的残基磷酸化

. 该残基的磷酸化介导 MET 与 c-Cbl E3 连接酶的结合，导致泛素化并最终降解 MET 作为自我调节负反馈回路的一部分。在这个过程中，所有的外显子突变都会不断受到干扰。

|MET突变检测

DNA测序：

MET 外显子 14 中的跳跃突变是高度异质的。因此，有效的 NGS 分析必须能够捕获如此广泛的突变。

. 如前所述，NGS方法分为扩增法和混合捕获法。扩增方法使用引物来检测基因组区域的目标基因序列。与混合捕获法相比，这种方法可以缩短检测时间，对一些难以测序的区域有更好的捕获，但在重复、偏倚、等位基因丢失的区域容易出现测序失真。一些MET EX14突变，例如碱基插入/缺失突变，通常位于扩增区域之外，可能会漏检。此外，碱基插入/缺失突变可能会干扰引物和位点的组合，从而干扰基于引物的扩增方法的检测。

RNA测序：

DNA测序只能通过检测外显子突变来预测MET外显子跳跃突变，突变发生在转录后剪接。因此，RNA测序弥补了DNA测序的不足

. 然而，RNA 不如 DNA 稳定，这限制了组织的保质期。此外，鉴于非恶性组织和肿瘤组织中 mRNA 表达的高度可变性，对测试结果的解释也带来了挑战。目前，RNA测序被用作传统测序的辅助手段，例如确认MET外显子14的跳过。 综上所述，虽然MET 14外显子表达的突变可能难以用基于DNA的测序平台检测，但RNA测序可用于直接判断外显子14是否被转录。

| 靶向治疗

激酶域突变：MET 靶向治疗对某些 MET 激酶域突变有效。然而，各种 MET-TKI 对特定突变的活性是不同的。具体来说，II 型 MET 抑制剂，如卡博替尼和 MET，对几种激酶结构域突变（如和 /L145））具有临床前活性，而 I 型 MET 抑制剂，如克唑替尼缺乏任何实质性的抗导致这些突变的肿瘤。所以，

MET激酶结构域突变已成为MET扩增和MET外显子14跳跃突变癌症患者对克唑替尼耐药的机制

.

MET外显子14跳跃突变：与可以改变MET激酶构象的激酶结构域突变不同，MET外显子14跳跃突变理论上也具有与野生型MET相似的激酶结构域。I 型和 II 型 MET-TKI 都可以抑制这种变异，并且这两种类型在 MET 外显子 14 跳跃突变的癌症模型中都显示出临床前活性。

前瞻性临床研究证实，克唑替尼（Ia 型 MET 抑制剂）对 MET 外显子 14 跳跃突变（ORR 32%）有效，Ib 型 MET 抑制剂卡马替尼、 和 wo 对跳跃突变也有良好效果。 MET的外显子14

（见表1）。

表1. MET外显子14跳跃突变肺癌的靶向治疗

MET融合

在化学转化的骨肉瘤细胞系中发现 TPR-MET 融合后，MET 首先被确定为致癌基因。随后，在胃癌、甲状腺癌、PRCC、肺腺癌、肝癌、胶质瘤和肉瘤患者中发现了MET融合。融合的确切频率尚不清楚，尽管它们在胶质瘤中很丰富，并且发生在大约 12% 的患者中。除了 TPR-MET 之外，还发现了许多其他 MET 融合（见图 4）。这些融合可以通过染色体内融合（例如 –MET、–MET、–MET 和 ST7 –MET）或染色体间融合（如-MET、TPR-MET、-MET和CD47-MET），每种类型约占所有MET融合的一半。在胶质母细胞瘤的儿科患者中，染色体内融合似乎更常见，也是最常见的。

MET 融合通常包括基因的外显子 15，它编码激酶域，而许多上游伴侣基因编码二聚体域，导致不依赖配体的连接 MET 激活。此外，发现一些融合事件（如 TPR-MET）排除了外显子 14，使得 MET 激活机制类似于 MET 外显子 14 的跳跃机制。有趣的是，包括外显子 14（如 -MET 和 -MET）的融合) 似乎比不包括外显子 14 的融合更致癌。在 -MET 融合中，启动子通常与全长 MET 基因融合，包括外显子 2 上的 MET 二聚化结构域。这种融合导致 MET 过表达并增加下游信号的激活。

图4.MET基因融合

| MET融合检测

多种分析技术可用于检测 MET 融合，包括 FISH、RT-PCR 和 NGS。然而，这些平台都没有在该应用中得到很好的研究，复杂和/或新的 MET 融合和重排特别难以用 FISH 检测。因此，NGS越来越受到重视，它是临床检测基因突变的首选方法。基于 DNA 的 NGS 可以可靠地检测各种 MET 融合。

虽然

然而，基因融合的DNA-NGS检测也存在局限性，例如在重复的内含子区域出现融合断点；内含子区域太长，无法设计引物；对新融合基因伙伴的检测也很有限。如前所述，这些缺陷可以通过 RNA-NGS 检测来避免

. 在一项研究中，DNA-NGS 作为驱动基因阴性队列进行测试，RNA-NGS 用于检测 12% 患者的驱动基因融合。这项研究的结果表明，RNA-NGS 可以补充基于 DNA 的 NGS 检测，用于 MET 融合基因检测，尤其是在没有驱动基因突变的情况下。

| 靶向治疗

迄今为止

MET靶向治疗在MET融合阳性癌症患者中的作用几乎被忽视

. MET TKI 可以诱导 TPR-MET 转化细胞系的细胞凋亡。据报道，克唑替尼对 MET 融合阳性肺腺癌或神经胶质瘤病例有效。目前正在进行多项临床试验以评估 MET TKI 的疗效，包括对 MET 融合肿瘤患者的试验（和）。然而，尚未在大型均质 MET 融合阳性队列中报告 MET TKI 的疗效。

MET过表达

MET可以在缺氧和/或炎症条件下转录诱导癌细胞增殖，减少细胞凋亡并促进转移。因此，即使没有 MET 扩增、突变或融合等基因组驱动因素，肿瘤也可能依赖于 MET 信号。MET过表达的诊断和治疗如下：

| MET过表达检测

免疫组织 (IHC)：许多抗 MET 抗体已用于免疫组织化学 (IHC) 测试。这些包括单克隆抗体（如 SP44、cMET 和 MET4）、多克隆抗体（如多克隆 MET）和磷酸化 MET 抗体（如 pMET）。

病理学家评估的 IHC 染色程度和强度提供了 MET 蛋白表达的半定量指标

. IHC 使用各种评分系统来定义 MET 表达和过度表达。

质谱（质量）：

选择性反应监测质谱（SRM-MS）可定量测定福尔马林固定石蜡包埋组织切片中的MET，重现性好，即使样品固定≥1年

. 与 IHC 相比，SRM-MS 不易受观察者间偏差的影响，并且可以检测到较低水平的蛋白质表达。SRM-MS 无法区分肿瘤和非恶性组织中表达的蛋白质，因此 MET 定量可能会受到混合基质和/或炎症浸润的影响。此外，SRM-MS比IHC具有更高的技术要求和更高的成本，这意味着该方法目前的应用还不是很广泛。IHC 目前普遍用于诊断病理学实验室，而 SRM-MS 的使用仍主要处于研究阶段。

| 靶向治疗

目前，

MET-TKI 在 MET 过表达的肿瘤患者中几乎没有活性

（形式2），幸运的是，正在开发新的MET靶向治疗策略，例如双特异性抗体、抗体组合和ADC。

表2.基于MET表达状态的靶向治疗结果

综上所述

识别具有 MET 驱动突变的癌症患者的过程是复杂的。从诊断的角度来看，连续变量（包括 MET 扩增水平或 MET 表达水平）需要标准化为具有临床意义的阈值，然后这些特征可用于指导治疗相关决策。为了最大限度地检测 MET 扩增、突变和/或融合的可能性，可能有必要将诊断转变为更全面和技术复杂的检测方法。应考虑使用 NGS 方法检测肿瘤活检和血浆样本的 DNA 和 RNA 水平变化。鉴于 MET 靶向治疗对许多此类癌症非常有效，因此有效检测 MET 驱动的癌症至关重要。

参考资料：

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